| 研究概要 |
ファシンは,アクチン繊維の束化タンパク質である。ファシンのアクチンへの結合は,リン酸化で制御されるとin vitroで示されている。これまでに,細胞内でもリン酸化でファシンのアクチンへの結合が制御されることを,リン酸化型ファシン及び脱リン酸化型ファシン(ファシンのリン酸化部位のアミノ酸を置換し,疑似脱リン酸化,疑似リン酸化したもの)を細胞に発現させ示した.つまり野生型はアクチン束と細胞質に,リン酸化型は細胞質に,脱リン酸化型はアクチン束に分布することを示した.
本申請の研究では,リン酸化によりファシンの細胞内の分布が異なる仕組みを,蛍光1分子解析で探ることを目的とした.EGFP-野生型ファシン,EGFP-脱リン酸化型ファシン,EGFP-リン酸化型ファシンを,ニューロブラストーマ(NG108-15)に導入した安定形質発現株をそれぞれ作成した.そして,EGFPラベルした蛍光ファシンを発現したニューロブラストーマの安定形質発現株を,神経様に分化させ,成長円錐を作らせた。この成長円錐で,EGFPの蛍光1分子計測でファシン分子の局在、運動、結合・解離等を解明するために,蛍光ファシン1分子の記録をし,ファシンの細胞内分布が,リン酸化で変化する仕組みの元となる分子機構を知ることを試みた.そして,EGFPファシンを発現したニューロブラストーマの成長円錐で,EGFPファシン1分子のスペックルを記録することに成功した.蛍光ファシン1分子スペックル記録は,九州工業大学の中川らが,蛍光消光法(FRAP)で記録したファシンの動態とほぼ同様の時間経過を示した.現在,データの収集と共に更に詳細な解析を進めている
|
