| 研究概要 |
本年度は、初期分化に関与している分子(初期分化関連分子)および未分化状態の維持に関与している分子(未分化維持分子)の探索を平行して行なった。初期分化関連分子については、DNA microarray法およびRT-PCR法を用いて、ES細胞の分化初期に特異的な発現を示すものとして、増殖因子やキナーゼ、転写因子を含む数個の遺伝子を見い出した。現在、これらの遺伝子について、RNAi法でその発現を抑制した時の分化に与える影響を検討している。
未分化維持分子に関しても、DNA microarray法を用いて、Zfp57,STAT3-activated gene 3(S3A3),Eed,Dax1,Gli1といった未分化状態ES細胞に特異的に発現するSTAT3標的分子群を見い出した。またその過剰発現によってLIF非依存的にES細胞の未分化性を維持できる分子としてβ-cateninも見い出した。これらのうち、Zfp57とS3A3に関しては遺伝子欠損ES細胞を樹立することが可能であったことから、未分化性の維持には必須ではないと思われる。一方、Eedは欠損ES細胞を樹立することができなかったため、Eedの誘導発現系を導入後に遺伝子破壊を行った。得られた株を用いて解析を進めた結果、Eedが「完全な」未分化状態の維持に必要であることを明らかにした。またβ-cateninやGliに関しても、その発現や機能を抑制すると未分化マーカーであるOct-3/4やNanogの発現が低下することが観察され、これらの分子が未分化性維持に関与している可能性が示唆された。
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