| 研究概要 |
本年度は以下のとおり研究を実施した。
1)HpTb遺伝子の組織特異的発現を担う転写調節領域の解析
バフンウニ胚T-brain(HpTb)は,発生過程において小割球由来細胞特異的に,孵化胞胚期から原腸胚期にかけて一過的に発現する転写因子である。本研究では,ウニ初期発生における小割球の分化に関わる遺伝子ネットワークの解明を目指し,HpTb遺伝子の転写調節領域の解析を試みた。HpTb遺伝子のプロモーターと転写開始点より下流の第二エキソンまでを含むおよそ7kbのゲノム遺伝子にレポーターのGFP遺伝子を連結した。この構築を胚に導入し,GFPの発現を観察したところ,小割球特異的に発現することを確認した。この結果から7kbに領域特異的な調節エレメントが含まれることが明らかになった。他ウニ2種のTb遺伝子とHpTb遺伝子の配列を比較したところ、4つ領域(C1-C4)において3種のウニで相同性の高い領域の存在が明らかになった。そこで、これらの領域を7kbから欠失させた構築を作成し、GFPの蛍光を観察したところ、C1,C2,C4の欠失によって本来発現する小割球以外の領域(外胚葉および内・中胚葉)での発現が見られた。これらの結果から、C1,C2,C4の領域は、小割球以外の領域での異所的な発現を抑える働きをもつ領域であることがわかった。
2)C4領域に結合する転写因子の解析
C4領域は、平成17年度に同定したHpTbエンハンサーコア領域と一致する。そこで、この領域に結合する核タンパク質をゲルシフト解析により調べた。その結果、HpTb遺伝子の転写される間充織胞胚期の核タンパク質に特異的に結合する因子を同定した。この結合タンパク質中にEtsタンパク質が含まれているか同定するために、HpEts1タンパク質をin vitro翻訳系により合成し、現在結合の有無とその特異性を確認している。
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