| 研究課題/領域番号 |
17580070
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| 研究機関 | 京都府立大学 |
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研究代表者 |
松井 裕 京都府立大学, 農学研究科, 教授 (40336730)
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| 研究分担者 |
渡部 邦彦 京都府立大学, 農学研究科, 助教授 (90184001)
辻本 善之 京都府立大学, 農学研究科, 助手 (20315930)
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| キーワード | プリンヌクレオチド生合成 / プリンヌクレオチド生産 / Bacillus subtilis / Corynebacterium ammoniagenes / E.coli / 好熱性細菌 / Glucose-6-P isomerase / Glucose-6-P dehydrogenase |
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| 研究概要 |
1.Bacillus subtilis、Corynebacterium ammoniagenesおよびE.coliの3種の細菌について、それぞれのプリンヌクレオチド生合成経路への代謝フラックスの特性を明らかにすることを目的とする。そのために、解糖系とペントースリン酸系の分岐に関わるGlucose-6-Phosphate(G6P)isomeraseとG6P dehydrogenaseの酵素化学的パラメーターデータを得る。
E.coliについては両酵素を純化精製し、両酵素のsubunit数、Km,Vmax,Kcat値を算出し、代謝フラックスが解糖系の方に傾いていることを明らかにした。Bacillus subtilisについては全ゲノム情報に基づいてPCRにより両酵素遺伝子を取得し、E.coliを用いて発現させることができた。純化精製中である。精製後両酵素の酵素化学的パラメーターを取得する。Corynebacterium ammoniagenesについてはゲノム情報が公開されておらず、類似のCorynebacterium glutamicumのゲノム情報よりC.glutamicumの両酵素遺伝子を取得(取得済)し、これらをプローブとして、該遺伝子をクローニングする予定である。
2.自然界より探索した好熱性Bacillusの中に比較的ミニサイズのクリプティックプラスミドを2種見出し、全塩基配列を決定し、複製起点領域を特定した。好熱性Bacillusでのベクターとしての利用可能性を追求中である。
3.Corynebacterium ammoniagenesを対象株として、プリンヌクレオチド生産株を育種するために、アデニンおよびグアニン要求株を取得中である。遺伝子ターゲティングにより育種することを目的に、SAMP synthetaseとGMP synthetase遺伝子をクローニングする。本菌のゲノム情報がないので、ゲノム情報のあるC.glutamicumより遺伝子を取得(取得済)し、これらをプローブとして、該遺伝子をクローニングする予定である。
4.これまでに見出されていない50℃以上で生育可能な好熱性のCorynebacterium属細菌を探索してきたが、これまでのところ発見できない。
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