| 研究概要 |
食品栄養としてのカルニチンによる脳機能加齢低下の予防・改善、虚血性脳疾患による神経細胞死の予防や治療への効果とメカニズムを明らかにすることを目的としている。平成17年度はラット胎児大脳皮質より調製した初代培養神経細胞を用いるモデル実験系で、脳虚血による神経細胞傷害とそれに対するカルニチンの作用の特性を明らかした。
ラット胎児(胎生18日)大脳皮質から神経細胞を調製し、defined Hormone mixtureを含むMEM/F12メディウムで培養した。培養3日目以降は、2%のFBSを含むMEM/F12(+defined Hormone Mixture)メディウムで培養し、虚血を模した低グルコース・低酸素状態に暴露する3日前から培地に10μMあるいは100μMのアセチル-L-カルニチン(ALCAR)を添加した。培養14日目に、それぞれのウェルにN_2ガスをバブリングしたグルコースを含まないKrebs-Ringer solutionを加え、滅菌したアルミ製のバットを被せN_2インキュベーター(95%N_2,5%CO_2)内でインキュベートした。2時間から6時間のインキュベーション後、メディウムを再び2%FBSを含むMEM/F12に交換し、CO_2インキュベーターにてさらに24時間インキュベートした。この低グルコース・低酸素状態における細胞生存率をWST-8テスト、および、抗MAP2抗体と抗GFAP抗体で染色し生存細胞数をカウントして求めた。その結果、神経細胞を2時間の低酸素・低グルコース状態に曝すと神経細胞生存率が20%減少した。培養メディウムにALCARを添加することにより低酸素・低グルコース条件下での神経細胞の生存率を10μM ALCARで91%、100μM ALCARで97%と濃度依存的に上昇させた。18年度はALCARによる脳虚血時の神経細胞保護作用のメカニズムの一端を明らかにしたい。
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