| 研究概要 |
グループ1コロナウイルスの多くはアミノペプチダーゼN(APN)をレセプターとして利用し、標的細胞へ侵入する。特に、ネコAPN (fAPN)は宿主の異なる多くのグループ1コロナウイルスがレセプターとして利用可能であることから、ネコAPN (fAPN)を発現する株化細胞やマウスを作製すれば、それらの細胞やマウスは多くのグループ1コロナウイルスに対する感染モデル細胞・疾患モデルマウスとして利用できるものと期待される。
大腸菌発現系を用いて組換えfAPNを作製し、組換えfAPNを抗原として抗fAPNモノクローナル抗体(MAb:マウス)、抗fAPNポリクローナル抗体(PAb :ウサギ、ニワトリ)を作製した。抗fAPNポリクローナル抗体はネコ伝染性腹膜炎ウイルス(FIPV)の異なる2つのタイプ(Type IとType II)の宿主細胞への吸着を阻止したが、抗fAPNモノクローナル抗体3クローンはType II FIPVの吸着は阻止したものの、Type I FIPVの吸着を阻止することはできなかった。以上の結果から、Type I、Type II FIPV両者ともfAPNをレセプターとするが、fAPN上のType I, Type II FIPVの結合ドメインが異なることが示唆された。
また、これらの抗fAPN抗体(MAb、PAb)は宿主の異なるグループ1コロナウイルス、TGEV(ブタ伝染性胃腸炎ウイルス)、CCoV(イヌコロナウイルス)の感受性細胞への感染を阻止したことから、これらのグループ1コロナウイルスはfAPN上の極めて近接した領域を吸着の標的としていることが示唆された。
クローニングしたfAPN cDNAを哺乳類細胞発現ベクター(pCDNA3)に組み込み、マウスマクロファージ系株化細胞(J774.1A)にトランスフェクトすることにより、fAPN発現マウスマクロファージ細胞株を得た。
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