| 研究概要 |
河川水中の環境ホルモンとして危惧される、人畜由来のエストラジオール(E2)、エストロン(E1)などは、汚水処理場等で塩素処理を受けると、塩素処理副生成物を生成すると考えられる。また、臭素イオン存在下では、臭素化が優先的に起こるとされる。18年度は、エストロジェン類の塩素処理副生成物を単離精製し、エストロジェン活性を調べた。
1.塩素処理副生成物の合成及び精製
E2、E1、エストリオール(E3)、エチニルエストラジオール(EE2)を50%メタノールに溶解し、臭化カリウム(KBr)存在下、非存在下で、次亜塩素酸ナトリウムを徐々に滴下した。HPLCで置換体の生成を確認し、反応液を処理し、中圧液クロで分離精製した。MS及びNMRスペクトルで構造決定をした。E1からは、2-ClE1、4-ClE1、2,4-diClE1、2,4,16,16-tetraClE1、10-Cl-1,4-estradiene-3,17-dione(10-Cl-3,17-dione)が単離された。KBr下では、2-BrE1、4-BrE1、2,4-diBrE1が生成した。E2、E3、EE2からは、いずれも2-Cl、4-Cl、2,4-diCl、2-Br、4-Br、2,4-diBr体が生成した。
2.エストロジェン活性、細胞増殖活性
ヒト及びメダカのエストロジェン受容体を用いたyeast two-hybridassay、及び筆者らが開発した乳癌細胞MCF7を用いたGFP発現システムにより、エストロジェン活性を測定した。いずれの化合物も、4-Cl体は元の物質と同等の活性があり、2-CL、2,4-diCL体の順に活性が低下した。E1由来の10-Cl-3,17-dioneは、E1と同等に活性があり、tetraClE1は活性が消失した。Br体ではさらに活性が消失した。MCF7の細胞増殖についても、同様の結果が得られた。
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