研究概要 |
本研究では、神経伝達物質放出に関わるsynaphinの生理的役割を解明するために、synaphinの関与する反応が、(1)いつ起こるのか、(2)どのようにSNARE複合体をオリゴマー化するのかを明らかにし、さらに(3)SNARE複合体オリゴマーの詳細な特徴づけを行うことを目的とする。以下に具体的に述べると、 (1)ケージドペプチドの適用と電気生理学的測定を組み合わせた高時間分解能解析により、synaphinの働く時期を明らかにする。 (2)SNARE複合体オリゴマー化に関わるsynaphinの活性部位を明らかにする。 (3)CSI-MS(コールドスプレーイオン化質量分析法)を用いてSNARE複合体オリゴマーの会合状態を明らかにする。 これまで、(1)については終了。(2)については現在進行中である。 (1)ケージドペプチドを用いた神経伝達物質放出におけるsynaphinのタイミングの測定 1.脱ケージ化は、レーザー光のエネルギーに依存的かつ飽和的に起こることがわかった。よってエネルギー量を調節することにより活性ペプチド濃度をコントロールすることが可能である。 2.脱ケージ化による阻害速度はペプチド濃度依存的かつ飽和的に増加することがわかった。 3.脱ケージ化による阻害速度はシナプス活性によっても変化する。このことから、synaphinがプライミング過程で働くことが明らかとなった。 4.脱ケージ化による阻害速度は高シナプス活性で最大に達することがわかった。 5.以上の結果から得られた最大阻害速度の逆数から、synaphinが働く時期はシナプス小胞が融合する直前180msecことがわかった。 (2)SNARE複合体オリゴマー化に関わるsynaphinの活性部位の同定 synaphinの部分ミュータントタンパク質(N末端側1/3,中心部1/3,C末端側1/3)を作製中。
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