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胎生期の脳は、神経系前駆細胞の活発な増殖と分化により発達していくが、様々な細胞外からの刺激分子により制御されている。増殖を促進する分子としては、FGF-2がよく知られているが、私たちはこれまでに、エンドセリン(ET)が細胞レベルでも、胎仔の脳内でも増殖を促進することを示した。この増殖促進はフィブロネクチン存在下で増強され、接着依存性であった。ETにより増殖した細胞は神経細胞、グリア細胞の他、平滑筋細胞にも分化し、昨年度は平滑筋細胞への分化機構について検討した。今年度は、ETによる増殖作用の分子機構について研究を行った。まずETによる神経系前駆細胞増殖促進に関わるG蛋白質について最近開発されたGq/11の特異的阻害剤、YM-254890とGiの阻害剤、百日咳毒素を用いて検討した。次に細胞増殖の接着依存性ついて、細胞接着の中心分子インテグリンに集積するFAKとpaxillinのチロシンリン酸化を指標にして検討し、次の結果を得た。1)ETによる細胞増殖やDNA合成促進は細胞外マトリックス依存性であるが、ERKの活性化は非依存的であった。2)ERKの活性化にはGi/Rasと、Gq/11/proteinkinase C(PKC)経路が関与していた。3)ETはFAKやpaxillinのリン酸化を上昇させ、これはET-B受容体アンタゴニスト、YM-254890、PKC阻害剤で抑制された。
以上の結果から、ET受容体により活性化されたGq/11はPKCを介して、Gi/Ras経路と共にERKを活性する。また、活性化されたPKCは同時にインテグリンシグナルも活性化してETによる細胞増殖促進の接着依存性に寄与していると考えられる。
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