| 研究課題/領域番号 |
17590133
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| 研究機関 | 東北薬科大学 |
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研究代表者 |
水柿 道直 東北薬科大学, 薬学部, 教授 (60004595)
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| 研究分担者 |
平塚 真弘 東北薬科大学, 薬学部, 講師 (50282140)
金野 由美子 東北薬科大学, 薬学部, 助手 (90364413)
佐々木 崇光 東北薬科大学, 薬学部, 助手 (20382674)
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| キーワード | CYP2D6 / 遺伝子多型 / SNP / Denaturing HPLC / ファルマコジェネティクス |
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| 研究概要 |
平成17年度は、Denaturing HPLCを用いてCYP2D6のエキソンSNPスクリーニングを行った。すでに採取してある200人分の日本人DNAサンプル(倫理委員会の承認とサンプル提供者のインフォームドコンセント取得済み)を鋳型として、各サンプルについてlong PCR法を用いた遺伝子完全欠損型変異アレルの確認を行った。次に、CYP2D6は塩基配列のホモロジーが高い偽遺伝子を有しているため、CYP2D6遺伝子を特異的に増幅する1次PCRを行った。ここで得られた増幅産物を鋳型とし、CYP2D6の9つのエキソン領域を特異的に増幅するプライマーを設計し、2次PCR増幅した。次にDenaturing HPLC WAVE3500付属の解析ソフトWAVE MAKERを用いて解析に最適な部分変性温度を決定し、ハイスループットSNP検出を行った。また、SNPの存在が疑われたサンプルについて、DNAシークエンサーCEQ8000を用いて、その詳細な塩基配列を決定した。その結果、日本人集団におけるCYP2D6のアミノ酸変異を伴う新規SNPとして、2556C>T(Thr261Ile)及び3835A>C(Lys404Gln)が検出された。またサイレントの新規SNPとして、1875G>A(Leu178Leu)、1998T>C(Pro219Pro)及び2945G>A(Val327Val)が検出された。既知のアミノ酸変異を伴うSNPまたは酵素活性に影響を与えるSNPとしては、100C>T(Pro34Ser)、1611T>A(Phe120Ile)、1617G>T(Ala122Ser)、1720A>C(Glu156Ala)、1846G>A(splicing defect)、2573insC、2850C>T(Asp296Cys)、3853G>A(Glu410Lys)、4180G>C(Ser486Thr)及びエキソン9におけるCYP2D6の配列のCYP2D7への置換が確認された。また、サイレントの既知のSNPでは、1039C>T(Phe112Phe)、1661G>C(Val136Val)、2470T>C(His232His)及び2575C>A(Pro267Pro)、イントロンSNPとしては、1598A>G、2424C>T、3356G>A及び3790C>Tが確認された。
平成18年度は、これらSNPによる酵素タンパクの機能変化について解析する予定である。
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