| 研究概要 |
破骨細胞は大型で多核の骨吸収細胞であり,骨のホメオスタシスに関与している。われわれは単核破骨細胞前駆体が融合して多核破骨細胞へと分化する際に必須の役割をしている7回膜貫通型受容体遺伝子DC-STAMPをサブトラクション法により単離した(Kukita et al, J.Exp.Med.200:941, 2004).本研究ではオーファン受容体であるDC-STAMPの機能解明のために,破骨細胞へと分化するマウス細胞株を用いたリガンド探索やゼブラフィシュを用いたDC-STAMPノックダウン実験を行うことを目的としている.本年度はDC-STAMPのリガンド同定のためにDC-STAMPを発現させたL1.2細胞が無刺激RAW-D細胞に酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼを誘導するという現象を利用してスクリーニングすることにした.そのためにまず無刺激RAW-D細胞表面上に発現している膜タンパク遺伝子10種類のそれぞれに対して2つ以上のsiRNAを作製し,RAW-D細胞に導入した.そのsiRNAを導入したRAW-D細胞とL1.2(DC-STAMP)を混合培養し,酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼを発現している細胞をキットを用いて染色し,細胞数を顕微鏡下で数えた.酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ・ポジティブ細胞が有意に減少するようなsiRNAがあれば,その遺伝子がリガンドである可能性が高いが,そのような遺伝子は未だ検出されていない.今後さらに遺伝子数を増やしてスクリーニングする必要があると考えられた.
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