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難治性癌の代表である膵癌(浸潤性膵管癌)の高悪性度について、個体レベルでのメカニズムは解明されていない。本研究では、ヒト膵癌マウス異種移植系を用いた個体レベルで、ヒト膵癌の転移モデルを作成し、転移能に関するNF-kB(nuclear factor-kappa B)遺伝子およびras遺伝子の機能を明らかにする。本年度は、以下の実験を遂行することをで目標とした。1)NF-kB遺伝子・ras遺伝子各々を標的とするリボザイム(RNA酵素)を用いて標的遺伝子を特異的に制御し、ヒト膵癌細胞におけるこれらの遺伝子の機能・相互作用を解析する。2)ヒト膵癌細胞を免疫不全動物の脾静脈・尾静脈へ導入して、肝転移・肺転移モデルを作成し、NF-kB標的リボザイムもしくはras標的リボザイム導入による転移抑制を試みる。
本年度の実績は、以下の通りである。
1.リボザイムの作成:
アデノウイルスベクターに組み込んだ活性型(変異型)K-ras遺伝子標的リボザイムの精製は順調に行われた。一方、NF-kB遺伝子標的リボザイムはアデノウイルスに組込めず、本年度はこのリボザイムについての精製はなされなかった。
2.ヒト癌細胞株へのK-ras癌遺伝子標的リボザイムの導入:
ヒト膵癌細胞株に対し、培養細胞レベルでアデノウイルスベクターに組込んだK-ras遺伝子標的リボザイムを感染導入し、時間依存的な導入状況を検討した。
3.ヒト腫瘍マウス異種移植系での転移モデルの作成:
免疫不全マウスの脾静脈に培養ヒト癌細胞を導入して、肝転移モデルを作成した。膵癌細胞株および大腸癌細胞株(コントロール)の転移条件等を検討し、来年度に行う転移抑制モデルの予備実験とした。
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