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2005 年度 実績報告書

デスレセプターによるネクローシス細胞死の新規シグナル伝達分子の同定と機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 17590434
研究機関大阪大学

研究代表者

大石 一人  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (60273702)

キーワードネクローシス / TNF / Fas / IL-1 / Rhomboidセリンプロテアーゼ / ストレス活性化キナーゼ / IκB-α
研究概要

ネクローシス様細胞死のシグナル伝達機構を明らかにするため、TNF-α刺激により非常に効率よく細胞死を起こすL929細胞を用いて、細胞死を抑制する分子の単離を行った。
マウス胎児及び3T3細胞レトロウイルスcDNAライブラリーをL929細胞に感染させてTNF-αで刺激し、生き残った細胞に対してレトロウイルスgag-pol及びenvを発現するアデノウイルスを感染させ、ゲノムにインテグレーションされているレトロウイルスゲノムをウイルス粒子として培養上清に回収した。この過程を繰り返したところ、4サイクル目よりTNF-α選択後の生存細胞数が増え始めたので、6サイクル目の生存細胞ゲノムから濃縮された遺伝子をPCRにより増幅した。
両方のライブラリーでcFLIPが濃縮されてきた。また、両ライブラリーからRhomboidセリンプロテアーゼファミリーに属する2つの遺伝子の5'末端を欠失した変異型が取れた。これらの変異型をヒトFasを高発現するL929hFas細胞を導入すると、抗Fas刺激による細胞死は全く抑制しないが、TNF-α刺激による細胞死を有意に抑制した。変異型Rhomboid発現細胞では、TNF-α刺激による活性酸素の産生や、JNKおよびp38キナーゼの活性化、IκB-αの分解は抑制されていたがERKおよびAKTキナーゼの活性化には影響がなかった。また、IL-1による上記キナーゼの活性化や、IκB-αの分解には全く影響がないことから、変異型Rhomboidによるシグナル伝達の抑制はTNFレセプターに特異的であると考えられた。しかしながら、全長RhomboidはTNF-α刺激による細胞死を抑制できなかったことから、変異型Rhomboidはドミナントネガティブとして働いているのではないかと予想してRhomboidの生理的機能の解析を進めている。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2006 2005

すべて 雑誌論文 (2件)

  • [雑誌論文] TbGPI16 is an essential component of GPI transamidase in Trypanosoma brucei2006

    • 著者名/発表者名
      Hong, Y. et al.
    • 雑誌名

      FEBS Letters 580

      ページ: 603-606

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] GPI7 is the second partner of PIG-F and involved in modification of glycosylphosphatidylinositol2005

    • 著者名/発表者名
      Shishioh, N et al.
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry 280

      ページ: 9728-9734

URL: 

公開日: 2007-04-02   更新日: 2016-04-21  

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