| 研究概要 |
AFPは臨床上は肝癌の腫瘍マーカーとして重要であるが、近年、細胞増殖に関与する働きがあることが報告されるようになり、AFPの抑制により癌細胞の増殖遅延が起きるかどうか検討した。
ヒト肝癌細胞株Huh7細胞を用い、AFP遺伝子から数種類の配列を選んで、si RNAを合成した。リポソームによる導入をおこない、細胞上清のAFPをELISAで測定し、また細胞からRNAを抽出しRT-PCRをおこなって、最もノックダウン効果の大きいものを選定した。このsiRNA(AFP)を用いて、細胞数の経時的変化やBrdUの取り込みを測定したところ、増殖を抑制する結果が得られた。現在、そのメカニズムを解明すべく実験を進めている。
一方、ストレスによって活性化されるMAPキナーゼJNKは、肝再生や肝発癌にも重要な働きをすることが報告されている。JNKのアイソフォームJNK1とJNK2に分けて、si RNA(JNK1,JNK2)を作成し、まずノックダウン効果を調べた。同様に、細胞増殖抑制効果を両者で確認できた。しかし、基質であるc-Junへの働きは異なっていた。
si RNA(AFP)とsi RNA(JNK1,JNK2)によるin vitroでの肝癌細胞増殖抑制が確認できたので、in vivoでの投与法の検討に入った。
ラット肝臓へのsi RNAの効果的な投与方法は、現在実験中である。投与経路としては、腹腔投与と経門脈投与をおこなって、尾静脈投与と比較する。リポソームやリピオドールとの混合の効果も検討する。
DENによる肝癌ラット作成と超音波による観察については、現在投稿準備中である。このモデルにsi RNAを投与して、肝癌の増殖抑制効果や発癌予防効果を検討する予定である。
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