| 研究課題/領域番号 |
17590632
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
渡邉 省三 三重大学, 保健管理センター, 教授 (20134934)
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| 研究分担者 |
垣内 雅彦 三重大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (70214244)
小西 正芳 三重大学, 保健管理センター, 准教授 (00397514)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2007
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| キーワード | C型肝炎ウイルス / 試験管内増殖 / IMY-N9細胞 / Huh7.5細胞 / COS細胞 / 免疫電子顕微鏡 |
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| 研究概要 |
HCV(genotype lb)全長遺伝子のcDNAをトランスフェクション・インフェクション法でヒト肝細胞とHepG2細胞のハイブリドーマであるIMY-N9細胞に遺伝子導入し、細胞内のHCVの構造蛋白質と非構造蛋白質の発現をWestern blot法で確認し、細胞培養上清中に高濃度のHCVRNAが存在することをreal time RT-PCR法で確認した。更に、この培養上清からショ糖密度勾配遠心法でウイルス粒子の分離・精製を行い、分画試料のHCVRNAとHCV core抗原の定量測定や免疫電子顕微鏡的検討を行うことによって、C型肝炎ウイルス粒子の産生を証明した。
このHCV含有培養上清を感染材料として、IMY-N9細胞、肝癌細胞株Huh7.5細胞とサル腎由来細胞株COS7細胞などの培養細胞に添加し、試験管内感染実験を行った。細胞内のHCVRNAはすべての細胞で感染材料添加後24時間には陰性化していて、各細胞内でのHCV増殖を確認できるレベルのHCVRNAを検出することはできなかったが、培養上清の経時的検討では、IMY-N9細胞は感染材料添加後48時間まで、Huh7.5細胞は添加後24時間までHCVRNAが陽性であったのに対し、HCV非感受性の陰性コントロールであるCOS7細胞では24時間後にHCVRNAはすでに陰性化していて、異なる推移を示した。
今回報告したIMY-N9細胞を用いたHCV産生細胞システムは成熟したHCV粒子を産生・放出していて、ヒト肝細胞由来培養細胞はこの系で産生されたHCVに対してある程度の感受性を有しているように思われたが、HCVのライフサイクルを解明するためには、HCVに対してより感受性の高い細胞株を開発して、さらに効率の良い試験管内感染・増殖系を樹立することが必要であると考えられた。
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