肝内胆汁うっ滞症の原因遺伝子特定と発症メカニズムの解明

2007 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 17590681
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 加川 建弘 東海大学, 医学部, 准教授 (30245469)
• 研究分担者: 渡辺 勲史 東海大学, 医学部, 准教授 (90167156) ; 猪子 英俊 東海大学, 医学部, 教授 (10101932) ; 田中 廣壽 東京大学, 医科学研究所・先端医療研究センター, 准教授 (00191974)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2007
• キーワード: 胆汁酸 / 肝内胆汁うっ滞症 / 胆汁酸トランスポーター / bile salt export pump / 遺伝子異常 / 先天性胆汁うっ滞症 / 糖鎖 / プロテアゾーム

研究概要

胆汁酸トランスポーター(Bsep)の生化学的機能的解析
(1)Bsepの胆汁酸輸送活性を測定する系の樹立
Bsepは細胞内の胆汁酸を細胞外に排出するトランスポーターであるため、極性を有するMDCKII細胞に胆汁酸を細胞内に取り込む蛋白Ntcpを同時に発現させることにより、Bsepの活性を定量的に測定する系を樹立した。
(2)Bsepにおける糖鎖修飾の意義
アミノ酸配列から想定される第一細胞外ループに4ヶ所存在する糖鎖修飾部位を欠失した種々の変異体を作製し、糖鎖修飾の意義について検討した。4つの部位はすべて糖鎖修飾を受けており、それ以外に糖鎖修飾部位はないこと、2ヶ所以上の糖鎖修飾がないとBsep蛋白が不安定になり、proteasomeで分解されることを明らかにした。すなわちBsep蛋白の安定な発現には4つのうち少なくとも2つ以上の糖鎖修飾が必要であるという興味深い結果が得られた。現在その機構につき解析中である。
(3)胆汁酸トランスポーター(BSEP)の点突然変異によって生じる2つの疾患の分子機構解析
BSEPの遺伝子異常によりPFIC2、BRIC2という2つの疾患が生じる。PFIC2は生後まもなく黄疸を発症し、肝移植を必要とするが、BRIC2は何らかのきっかけで黄疸を発症するものの自然に消退する予後良好な疾患である。これら2つの疾患の発症機序、重篤性の違いの原因を明らかにすることを目的として、ラットBsepにPFIC2、BRIC2変異を導入した変異体を作成し、MDCKII細胞に遺伝子導入し、Bsepの胆汁酸輸送活性、細胞内発現量、細胞内局在を解析した。その結果、PFIC2、BRIC2の重篤性の違いは変異Bsep蛋白の安定性の差に起因することを明らかにした。Bsep蛋白を安定化する薬剤が本疾患の治療に有効である可能性を示唆しており、今後そのような薬剤の開発に取り組む予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Phenotypic differences in PFIC2 and BRIC2 correlate with protein stability of mutant Bsep and impaired taurocholate secretion in MDCK II cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Kagawa T, et. al.
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294 ページ: G58-67
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Eight-week oral administration of meloxicam,a non-steroidal anti-inflammatory drug,prevents dose reduction of pegylated interferon alpha-2a in the treatment of chronic hepatitis C (2008)
  • 著者名/発表者名: Kagawa T, et. al.
  • 雑誌名: Hepatology Research 38 ページ: 259-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phenotypic differences in PFIC2 and BRIC2 correlate with protein stability of mutant Bsep and impaired taurocholate secretion in MDCK II cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Kagawa, T., Watanabe, N., Mochizuki, K., Numari, A., Ikeno, Y., Itoh, J., Tanaka, H., Arias, IM., Mine, T
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294(1) ページ: 58-67
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Eight-week oral administration of meloxicam, a non-steroidal anti-inflammatory drug (2008)
  • 著者名/発表者名: Kagawa, T., Shiozawa, H., Kojima, S., Takashimizu, S., Nagata, N., Numata, M., Morino, F., Nishizaki, Y., Mochizuki, K., Watanabe, N., Watanabe, T., Matsuzaki, S., Mine, T
  • 雑誌名: prevents dose reduction of pegylated interferon alpha-2a in the treatment of chronic hepatitis C. Hepatol Res. 38(3) ページ: 259-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] An ETA receptor antagonist induces the dilatation of sinusoidal endothelial fenestrae:Implication for endothelin-1 in hepatic microcirculation (2007)
  • 著者名/発表者名: Norihito Watanabe, Shinji Takashimizu, Yasuhiro Nishizaki, Seiichiro Kojima, Tatehiro Kagawa and Shohei Matsuzaki
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology 42(9) ページ: 775-782
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Altered cell motility behaviour and reorganization of contractile proteins after primary monolayer cultures of isolated hepatocytes (2007)
  • 著者名/発表者名: N.Watanabe, S.Takasimizu, S.Kojima, T.Kagawa, Y.Nishizaki, T.Mine
  • 雑誌名: Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 32(1) ページ: 34-41
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficacy of balloon-occluded retrograde transvenous obliteration(B-RTO)performed in a patient with primary biliary cirrhosis with severe recurrent hepatic encephalopathy due to splenorenal shunt (2007)
  • 著者名/発表者名: S.Takasimizu, N.Watanabe, S.Kojima, T.Kagawa, T.Mine
  • 雑誌名: Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 32(2) ページ: 70-74
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Initial site of bile regurgitation following extrahepatic biliary obstruction in living rats (2007)
  • 著者名/発表者名: N.Watanabe, S.Kojima, S.Tkasimizu, Y.Nishizaki, T.Kagawa, MJ Phillips
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 22(11) ページ: 1983-1992
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two N-Linked Glycans Are Required to Maintain Transport Activity of the Bile Salt Export Pump(Abcbll)in Mdck II Cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki K, Kagawa T, Numari A, Harris MJ, Itoh J, Watanabe N, Mine T, Arias IM
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 292 ページ: G818-G828
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical and pathological features of a prolonged type of acute intrahepatic cholestasis (2007)
  • 著者名/発表者名: N.Watanabe, S.Takasimizu, S.Kojima, T.Kagawa, Y.Nishizaki, T.Mine, S.Matsuzaki
  • 雑誌名: Hepatology Research 37 ページ: 598-607
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] 肝内胆汁うっ滞や急性肝炎で発症した血液悪性疾患 (2007)
  • 著者名/発表者名: 小嶋 清一郎, 加川 建弘, 渡辺 勲史, 峯 徹哉, 小泉 淳
  • 雑誌名: 消化器科 45(6) ページ: 621-8
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 肝細胞癌診断における腫瘍マーカーと画像診断 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 峯 徹哉
  • 雑誌名: EBMジャーナル 8(1) ページ: 22-27
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Two N-linked glycans are required to maintain the transport activity of the bile salt export pump(ABCB11) in MDCK II cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki, K., Kagawa, T., Numari, A., Harris, MJ., Itoh, J., Watanabe, N., Mine, T., Arias, IM
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 292(3) ページ: 818-28
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] An ETA receptor antagonist induces the dilatation of sinusoidal endothelial fenestrae : Implication for endothelin-1 in hepatic microcirculation (2007)
  • 著者名/発表者名: Norihito, Watanabe, Shinji, Takashimizu, Yasuhiro, Nishizaki, Seiichiro, Kojima, Tatehiro, Kagawa, Shohei, Matsuzaki
  • 雑誌名: Joumal of Gastroenterology 42(9) ページ: 775-782
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Altered cell motility behaviour and reorganization of contractile proteins after primary monolayer cultures of isolated hepatocytes (2007)
  • 著者名/発表者名: N., Watanabe, S., Takasimizu, S., Kojima, T., Kagawa, Y., Nishizaki, T., Mine
  • 雑誌名: The Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 32(1) ページ: 34-41
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Clinical and pathological features of a prolonged type of acute intrahepatic cholestasis (2007)
  • 著者名/発表者名: N., Watanabe, S., Takasimizu, S., Kojima, T., Kagawa, Y., Nishizaki, T., Mine, S., Matsuzaki
  • 雑誌名: Hepatology Research 37 ページ: 598-607
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Efficacy of balloon-occluded retrograde transvenous obliteration(B-RTO) performed in a patient with primary biliary cirrhosis with severe recurrent hepatic encephalopathy due to splenorenal shunt (2007)
  • 著者名/発表者名: S., Takasimizu, N., Watanabe, S., Kojima, T., Kagawa, T., Mine
  • 雑誌名: Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 32(2) ページ: 70-74
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Initial site of bile regurgitation following extrahepatic biliary obstruction in living rats (2007)
  • 著者名/発表者名: N., Watanabe, S., Kojima, S., Tkasimizu, Y., Nishizaki, T., Kagawa, MJ., Phillips
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 22(11) ページ: 1983-1992
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A case of adult-onset type II citrullinemia-deterioration of clinical course after infusion of hyperosmotic and high sugar solutions (2006)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H, Kagawa T, Kobayashi K, Hirabayashi H, Yui M, Begum L, Mine T, Takagi S, Saheki T, Shinohara Y.
  • 雑誌名: Med Sci Monit 12(2) ページ: CS13-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Taurolithocholate impairs bile canalicular motility and canalicular bile secretion in isolated rat hepatocyte couplets (2006)
  • 著者名/発表者名: Watanabe N, Kagawa T, Kojima S, Takashimizu S, Nagata N, Nishizaki Y, Mine T.
  • 雑誌名: World J Gastroenterol 12(33) ページ: 5320-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Primary biliary cirrhosis with multinucleated hepatocellular giant cells:implications for pathogenesis of primary biliary cirrhosis (2006)
  • 著者名/発表者名: Watanabe N, Takashimizu S, Shiraishi K, Kagawa T, Nishizaki Y, Mine T, Akatsuka A, Selmi C, Gershwin ME
  • 雑誌名: Eur J Gastroenterol Hepatol. 18(9) ページ: 1023-7
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical significance of serum matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in chronic liver disease (2006)
  • 著者名/発表者名: N.Watanabe, Y.Nishizaki, S.Kojima, S.Tkasimizu, T.Kagawa, K.Shiraishi, T.Mine, S.Matsuzaki.
  • 雑誌名: Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 31(3) ページ: 86-91
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Predictive factors for the response to lamivudine in HBV-infected patients with chronic hepatitis and cirrhosis (2006)
  • 著者名/発表者名: Y.Nishizaki, T.Morizane, S.Kojima, K.Sakuma, A.Koyama, H.Shiozawa, F.Morino, J.Aoki, S.Matsuzaki, T.Kagawa, N.Watanabe, T.Mine.
  • 雑誌名: Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 31(3) ページ: 121-124
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] 肝内胆汁うっ滞.消化器疾患-state of arts II (2006)
  • 著者名/発表者名: 渡辺 勲史, 加川 建弘
  • 雑誌名: 肝、胆、膵 10 ページ: 577-580
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] A case of adult-onset type II citrullinemia-deterioration of clinical course after infusion of hyperosmotic and high sugar solutions (2006)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, H., Kagawa, T., Kobayashi, K., Hirabayashi, H., Yui, M., Begum, L., Mine, T., Takagi, S., Saheki, T., Shinohara, Y
  • 雑誌名: Med Sci Monit 12(2) ページ: 13-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Taurolithocholate impairs bile canalicular motility and canalicular bile secretion in isolated rat hepatocyte couplets (2006)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, N., Kagawa, T., Kojima, S., Takashimizu, S., Nagata, N., Nishizaki, Y., Mine, T
  • 雑誌名: World J Gastroenterol 12(33) ページ: 5320-5
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Primary biliary cirrhosis with multinucleated hepatocellular giant cells : implications for pathogenesis of primary biliary cirrhosis (2006)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, N., Takashimizu, S., Shiraishi, K., Kagawa, T., Nishizaki, Y., Mine, T., Akatsuka, A., Selmi, C., Gershwin, ME
  • 雑誌名: Eur J Gastroenterol Hepatol 18(9) ページ: 1023-7
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Clinical significance of serum matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in chronic liver disease (2006)
  • 著者名/発表者名: N., Watanabe, Y., Nishizaki, S., Kojima, S., Tkasimizu, T., Kagawa, K., Shiraishi, T., Mine, S., Matsuzaki
  • 雑誌名: The Tokai Journal of Experimental and Clinical Medicine 31(3) ページ: 86-91
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Predictive factors for the response to lamivudine in HBV-infected patients with chronic hepatitis and cirrhosis (2006)
  • 著者名/発表者名: Y., Nishizaki, T., Morizane, S., Kojima, K., Sakuma, A., Koyama, H., Shiozawa, F., Morino, J., Aoki, S., Matsuzaki, T., Kagawa, N., Watanabe, T., Mine
  • 雑誌名: Tokai J Exp Clin Med 31(3) ページ: 121-124
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Eight-week oral administration of meloxicam, a COX-II specific non-steroidal anti-inflammatory drug (2007)
  • 著者名/発表者名: Tatehiro, Kagawa, Hirokazu, Shiozawa, Sei-ichiro, Kojima, Shinji, Takashimizu, Naruhiko, Nagata, Makoto, Numata, Fumitoshi, Morino, Yasuhiro, Nishizaki, Norihito Watanabe, Shohei, Matsuzaki, Tetsuya, Mine
  • 学会等名: prevents dose reduction of pegylated interferon alfa-2a in the treatment of chronic hepatitis C. 58th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
  • 年月日: 20071102-06
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC 2,良性反復性肝内胆汁うっ滞症BRIC2でみられるBSEP変異体の機能解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第29回胆汁酸研究会
  • 発表場所: つくば
  • 年月日: 2007-11-24
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Eight-week oral administration of meloxicam,a COX-II specific non-steroidal anti-inflammatory drug,prevents dose reduction of pegylated interferon alfa-2a in the treatment of chronic hepatitis C (2007)
  • 著者名/発表者名: Tatehiro Kagawa, et. al.
  • 学会等名: 第58回全米肝臓学会
  • 発表場所: ボストン
  • 年月日: 2007-11-04
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC 2,良性反復性肝内胆汁うっ滞症BRIC2でみられるBSEP変異体の機能低下は蛋白安定性の低下に起因する。(ワークショップ:胆汁酸研究の進歩) (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第11回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2007-10-18
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] 胆汁酸トランスポーターの変異で発症する先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC2,良性反復性肝内胆汁うっ滞症BRIC 2の発症メカニズムの解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第6回生体機能研究会
  • 発表場所: 箱根
  • 年月日: 2007-09-22
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Bile salt export pump(Bsep,ABCB11)の機能発現には少なくとも2つ以上の糖鎖修飾が必要である (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第43回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2007-05-31
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] SHORTENED BIOCHEMICAL HALF-LIFE IS RESPONSIBLE FOR THE IMPAIRED BILE ACID TRANSPORT FUNCTION OF D482G-PFIC2 MUTATION OF BILE SALT EXPORT PUMP (2006)
  • 著者名/発表者名: Tatehiro, Kagawa, Kaori, Mochizuki, Asano, Numari, Norihito, Watanabe, Tetsuya, Mine, Irwin M., Arias
  • 学会等名: 57th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
  • 年月日: 20061027-31
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC 2でみられるBSEP変異体の機能低下は蛋白安定性の低下に起因する (2006)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第14回浜名湖シンポジウム
  • 発表場所: 浜松
  • 年月日: 2006-12-22
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] SHORTENED BIOCHEMICAL HALF-LIFE IS RESPONSIBLE FOR THE IMPAIRED BILE ACID TRANSPORT FUNCTION OF D482G-PFIC2 MUTATION OF BILE SALT EXPORT PUMP (2006)
  • 著者名/発表者名: Tatehiro Kagawa, et. al.
  • 学会等名: 第57回全米肝臓学会
  • 発表場所: ボストン
  • 年月日: 2006-10-29
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] 肝内胆汁鬱帯や急性肝炎で発症した血液悪性疾患の検討.(ワークショップ:他臓器疾患と肝臓) (2006)
  • 著者名/発表者名: 小嶋 清一郎, 加川 建弘, 渡辺 勲史
  • 学会等名: 第48回日本消化器病学会大会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2006-10-11
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC 2でみられるBSEP変異体の蛋白安定性に関する検討 (2006)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第4回東日本胆汁酸研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2006-07-22
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC 2でみられるBSEP変異体の機能低下は蛋白安定性の低下に起因する.2006.5.25-26,京都 (2006)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 他
  • 学会等名: 第42回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2006-05-25
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [図書] 先天性肝内胆汁うっ滞症PFIC2でみられるBSEP変異体の機能低下は蛋白安定性の低下に起因する.消化器発癌における炎症、再生、細胞応答の役割.消化器分子生物学(第14回浜名湖シンポジウム) (2007)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 望月 香織, 沼里 亜左乃, 渡辺 勲史, 松崎 松平, 峯 徹哉
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: アークメディア
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [図書] 胆汁酸トランスポーターにおける糖鎖修飾の意義.消化器疾患における自然免疫(innateimmunity).消化器分子生物学(第12回浜名湖シンポジウム) (2005)
  • 著者名/発表者名: 加川 建弘, 望月 香織, 沼里 亜左乃, 渡辺 勲史, 峯 徹哉, 松崎 松平
  • 総ページ数: 4
  • 出版者: アークメディア
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より