| 研究課題/領域番号 |
17590830
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 香川大学 |
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研究代表者 |
清元 秀泰 香川大学, 医学部附属病院, 講師 (00304585)
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| 研究分担者 |
西山 成 香川大学, 医学部, 助手 (10325334)
原 大雅 香川大学, 医学部, 助手 (50398038)
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| キーワード | NDA(P)Hオキシダーゼ / 腎不全 / 血液透析 / 酸化ストレス / p22phox / TBARS / 白血球 / RT-PCR |
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| 研究概要 |
腎障害を有する臨床症例のサンプルを回収し、酸化ストレス量の定量と白血球NAD(P)Hオキシダーゼの遺伝子発現を検討するために下記の事項を行った。
(1)患者のエントリー
充分なインフォームド・コンセントのもと、慢性腎炎(IgA腎症)症例8例、慢性腎不全症例で血液透析中の74例、健康ボランティア10例、生活習慣病症例5例のエントリーを行い、承諾書を得た。エントリーが不十分な群では、引き続き研究参加を次年度に持ち越していく予定である。
(2)採血と検体の分離
各々の症例より末梢血採血にて血清10mlとPAXgene Blood RNAシステム(Qiagen社製)を用いて白血球のmRNAを分離し、-80℃にストックした。
(3)酸化ストレスマーカーの測定
酸化ストレスマーカーとしてTBARSを測定したところ、血液透析腎不全群で有意な酸化ストレス量の亢進を認めた。
(4)酸化ストレスマーカーの測定
白血球のmRNAをreal-time polymerase chain reaction (RT-PCR)法を用いてNAD(P)Hオキシダーゼのp22phoxとgp91phoxを測定した。遺伝子発現をhouse keeping geneであるβ-actinを対照に検討したところ、P22phoxのmRNA量は血液透析腎不全群で有意な上昇を認めた。
(5)臨床データとの多変量解析
解析は予定症例のエントリーが終了しなかったため中間結果であるが、血液透析では透析期間が長期に及ぶ症例ほど酸化ストレス量、p22phoxの遺伝子発現量が増加していた。
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