研究課題
基盤研究(C)
まずアミロイドβがニューロンの代謝に与える影響、とりわけ解糖系vs酸化的リン酸化の変化に注目して酵素活性、代謝率、NADPH含有量の変化、抗酸化物の含有量の変化などを評価した。ニューロンおよびアストログリアのアミロイドβへの曝露としては、Aβ_<1-42>を含んだメディウムで細胞を培養した。2μMのAβ_<1-42>で4日間反応させ、解糖系、酸化的リン酸化、ROS産生を評価した。Depositを形成していないAβ_<1-42>そのものからはROSは産生されないとの報告もある。メディウム中に各種ROS産生系を加えることでアミロイド障害性をモデル化し、ニューロン、アストログリアの解糖系、酸化的リン酸化、細胞内でのROS産生を測定した。また、アミロイドの沈着を促す条件(globular Aβ)での測定を試みている。ROSの測定方法として、蛍光色素による測定を行う。Superoxide anionの測定としてhydroethidine (HE)、hydroxyl radicalおよびhydrogen peroxideの測定としてdichlorofluorescein (DCF)、nitric oxide (NO)の測定として4,5-diaminofluorescein diacetate (DAF-2 diacetate)を用いている。Xanthine/ xanthine oxidaseによるsuperoxide産生系、hydrogen peroxideとperoxidaseによる反応、各種NOドナー化合物を利用して、蛍光色素の感度、選択性、キャリブレーションを行う。今後は古典的なROSの測定法を併用していく。Cytochrome C還元法、Griess反応、spin-trap法などである。
すべて 2005
すべて 雑誌論文 (3件)
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