| 研究課題/領域番号 |
17590935
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
奥屋 茂 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (20214083)
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| 研究分担者 |
松原 淳 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (40311815)
鶴 政俊 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (20379960)
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| キーワード | GLUT4 / トランスロケーション / リサイクリング / アダプター蛋白 / アンキリン構造 / 糖取り込み / インスリン / 脂肪細胞 |
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| 研究概要 |
GLUT4のリサイクリングやインスリン依存性トランスロケーションの制御に、GLUT4結合蛋白が重要な役割をはたすと想定されている。この蛋白を同定する目的で、GLUT4をbaitにtwo-hybrid法により脂肪細胞cDNAライブラリーのスクリーニングを行い、蛋白-蛋白結合に関与するとされる"アンキリン構造"と複数のリン酸化想定部位をもつ新規蛋白p61のクローニングに成功した。3T3-Ll脂肪細胞にp61を過剰発現させると、インスリン依存性糖取り込みならびにGLUT4トランスロケーションが促進する結果を得た。そこでさらにp61の機能解析を進めてきた。
1.抗体作製:モルモット免疫で抗血清を作製後精製し、強制発現p61を認識することをウエスタンで確認し、脂肪細胞内在性p61に関しても予想サイズのバンドとして検出し得た。
2.p61ノックダウンによる糖輸送活性への影響:アデノウイルスベクターでshort hairpin RNAを導入することでp61をノックダウンした3T3-L1脂肪細胞を作製した。p61をノックダウンすることで、インスリン依存性のGLUT4トランスロケーションは抑制され、糖取り込みも抑制される傾向にあった。
3.P61の細胞内局在:固定・免疫染色後の3T3-L1脂肪細胞を共焦点顕微鏡で観察した結果、脂肪細胞内でp61はGLUT4と同様に細胞質内に存在し、部分的には共存する可能性が示唆された。一方、インスリン刺激下で、その局在に明らかな変化は認められなかった。
これらの検討で、p61蛋白はインスリン依存性に細胞内局在変化を起こす可能性は低く、一方GLUT4のトランスロケーションに影響することで、糖取り込みに関与する可能性が示唆された。
これらの結果は、平成19年度日本糖尿病学会年次学術集会において発表予定である。さらに、今後の論文投稿へと準備を進めている。
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