| 研究課題/領域番号 |
17590935
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
代謝学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
奥屋 茂 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (20214083)
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| 研究分担者 |
松原 淳 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (40311815)
鶴 政俊 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (20379960)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | GLUT4 / トランスロケーション / リサイクリング / アダプター蛋白 / アンキリン構造 / 糖取り込み / インスリン / 脂肪細胞 |
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| 研究概要 |
【目的】GLUT4のリサイクリングやインスリン依存性トランスロケーションの制御に、GLUT4結合蛋白が重要な役割をはたすと想定されている。この蛋白を同定する目的で、GLUT4をbaitにtwo-hybrid法により脂肪細胞cDNAライブラリーのスクリーニングを行い、蛋白-蛋白結合に関与するとされる"アンキリン(ANK)構造"と複数のリン酸化想定部位をもつ新規蛋白p61のクローニングに成功した。3T3-L1脂肪細胞にp61を過剰発現させると、インスリン依存性糖取り込みならびにGLUT4トランスロケーションが促進する結果を得た。そこでさらにp61の機能解析を進めた。
【方法】(1)抗体作製:モルモット免疫で抗血清を作製後アフィニティー精製し、p61に対する特異的抗体を得た。(2)ノックダウンによる糖輸送活性への影響=アデノウイルスベクターでshort hairpinRNAを導入することでp61をノックダウンした3T3-L1脂肪細胞を作製し、インスリン依存性のGLUT4トランスロケーションや糖取り込みを検討した。(3)細胞内局在:固定・免疫染色後の3T3-L1脂肪細胞を共焦点顕微鏡で観察し、p61およびGLUT4の細胞内局在を検討した。
【結果】脂肪細胞内でANK構造蛋白p61はGLUT4と同様に細胞質内に存在し、部分的には共存する可能性が示唆された。p61をノックダウンすることで、インスリン依存性のGLUT4トランスロケーションは抑制され、糖取り込みも抑制される傾向にあった。一方、インスリン刺激下で、p61の局在に明らかな変化は認められなかった。
【結論】GLUT4結合ANK構造蛋白p61は、インスリン依存性に細胞内局在変化を起こす可能性は低く、一方GLUT4のトランスロケーションに影響することで、糖取り込みに関与する可能性が示唆された。
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