| 研究概要 |
RNA interference libraryを使用した、成長ホルモン(GH)遺伝子のローカスコントロールリージョン(LCR)に結合する因子のクローニング
LCRの下流に、GHプロモーター、およびGreen Fluorescent Protein(GFP) cDNAを結合させたプラスミド(LCR-GH-GFPベクター)を作製した。さらに、このプラスミドに、CMVプロモーターと結合させたRed Fluorescent Protein(RFP) cDNAを挿入した。このプラスミドをマウス下垂体細胞株にトランスフェクトしたが、トランスフェクション効率が不十分であり、このレポーターベクターが導入された下垂体細胞株が十分得られていない。現在、導入効率を改善ため,種々の検討を行っている。導入効率が改善した際には、RNA interference libraryと同時に導入し、セルソーターでGFP、RFP発現を指標とし、LCR結合因子の単離を試みる。
GH産生細胞分化におけるGH遺伝子LCRの意義
上記のプラスミドをES細胞のゲノムDNAに導入した細胞を樹立した。このES細胞を種々の条件下で,培養した。特定の条件下で、GH-LCR遺伝子下に位置するGFPの発現が増大することが確認できた。実際に,このとき内因性GH発現が増加しているか確認するため、GHをEIAで測定したところ、コントロールに比べ増加しており、この条件で、ES細胞からGH産生細胞の方向に分化させられる可能性が示唆された。同時に、LCRのGH産生細胞分化において作用している可能性が示唆された。
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