| 研究課題/領域番号 |
17590999
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
石川 秀明 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (40294623)
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| 研究分担者 |
小幡 雅則 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (80158831)
水上 洋一 山口大学, 総合科学実験センター, 助教授 (80274158)
津山 尚宏 広島大学, 大学院医歯薬総合研究科, 講師 (10335747)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 骨髄腫 / IL-6 / 刺激伝達分子 / Lyn / CD45 / PI 3-kinase |
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| 研究概要 |
骨髄腫細胞の増殖にはCD45によって制御されるsrc型PTKの活性化が重要であることから、その下流で働く刺激伝達分子を同定する目的で、(His_6)tag化したLynをIL-6依存性CD45^+骨髄腫細胞株ILKM2およびILKM8に強制発現させたところ、IL-6による細胞増殖が促進された。過剰発現したLynは恒常的に活性化されでおり、さらにphosphatidylinositol-3 kinase(PI3-K)およびAktの活性化が亢進していたが、STAT3とERK1/2のリン酸化は変化していなかった。これらの結果は以前の知見を支持するものであり、LynはSTAT3とERK112とは独立にIL-6による骨髄腫細胞増殖に寄与していることが確認された。また、PI3-K選択的阻害剤LY294002が細胞増殖を著明に抑制したことからLynの下流で活性化されるPI3-K刺激伝達系がIL-6による骨髄腫細胞増殖に重要であることが今回新たに解った。現在、(His)_6 tag化したLynを過剰発現するこれらの細胞の細胞抽出液をNi-beadsによりアフィニティー精製し、Lynと会合する分子群を質量分析法により同定しようと試みているところである。これにより、IL-6による骨髄腫細胞増殖におけるLynの下流で活性化される刺激伝達分子群をより綱羅的に解析できると考えている。
一方で現在、骨髄腫細胞におけるIL-6応答刺激伝達分子群の網羅的解析を行っており、IL-6処理後に脂質ラフトに存在する分子、チロシンりん酸化される分子、脂質ラフト外でチロシン脱りん酸化される分子を質量分析法により既に同定済みである。今後これらの分子のIL-6刺激前後の細胞内局在およびチロシンりん酸化を確認する予定である。
また、IL-6依存性骨髄腫細胞株を用いて、DNAマイクロアレイによるIL-6刺激後の遺伝子発現の経時的解析を行ったところ、早期には多くのSTAT3標的遺伝子、遅れていくつかのNF-KB標的遺伝子の発現が認められ、IL-6誘導遺伝子の中で新たにBcl-6遺伝子の重要性を明らかにした。それ以外にもIL-6によって発現が変化する遺伝子を多数同定しているので、Bcl-6の標的遺伝子も含めて、さらにIL-6刺激後の細胞増殖を担う遺伝子発現カスケードを明らかにしていきたい。
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