MLL/AF4遺伝子の癌化能と分子標的薬の基礎実験

2006 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 17591014
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 檀 和夫 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90142538)
• 研究分担者: 猪口 孝一 日本医科大学, 医学部, 教授 (10203267)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2006
• キーワード: t(4;11)(q21;q23) / MLL / AF4 / Flt3 / ITD / D835V / 2nd hit

研究概要

1.t(4;11)(q21;q23)をもつ細胞株の樹立に成功し、MLL/AF4cDNAのcloningに成功した。
2.MLL/AF4cDNAのcloningに成功した。
3.FMS-like receptor tyrosine kinase 3(Flt3)cDNAにinternal tandem duplications(ITD)とD835V(Sub)の変異を導入した。
4.レンチウイルス発現ベクター(pCL20c Mp)を完成させIL3依存性細胞株32Dcへの遺伝子導入を施行、MLL/AF4、Flt3/Wild、Flt3/ITD、Flt3/Sub、MLL/AF4+Flt3/Wild、MLL/AF4+Flt3/Subの安定形質発現細胞株を作成しクローニングに成功した。
5.IL3非存在下においてFlt3/ITD、MLL/AF4+Flt3/Sub導入32Dc細胞は増殖能を認めるのに対して、MLL/AF4、Flt3/Wild、Flt3/Sub、MLL/AF4+Flt3/Wild導入細胞には増殖能を認めなかった。またメチルセルロース半固形培養におけるcolony assayにおいても同様の結果であった。
6.上記4の細胞においてFlt3/ITD、MLL/AF4+Flt3/Sub導入32Dc細胞はAnnexin V発現が低く抗アポトーシス能を獲得していることが示された。
7.上記4の細胞に対してG-CSF添加による分化誘導を行うとFlt3/ITD、MLL/AF4+Flt3/Sub導入32Dc細胞は分化が抑制されているのに対し、これら以外の導入細胞はmyelomonocyteeへの分化が認められた。
以上よりMLL/AF4には腫瘍増殖能、分化抑制能があることが示されたが、単独で白血病を発症させることは難しくFlt3のような2nd hitの異常が必要であることが示された。