| 研究概要 |
腸管凝集性大腸菌enteroaggregative Eseheriehia coli(EAEC)のバイオフィルム関連因子の検討-外膜排出ポンプTolCの役割-
EAECの外膜表層に存在するdispersin(Aap)の外膜排出ポンプAatAは、大腸菌の異物排出蛋白TolCのホモログである。TolCがAatAと同様にAapを分泌するかどうか、またEAECの病原性に関与しているかを検討する目的で、tolC欠損株とaatA・tolC両欠損株、さらにそのcomplemente株を作成した。Aap分泌能は、培養上清のAapをWestern blotで検討。付着試験は、24穴ポリスチレンプレートで培養後、浮遊細胞と底部の付着菌体を回収し,OD_<600>で定量化した。Transwell assayでは,透過膜を介して欠損株と野生株を共培養し相互作用を検討した。さらに走査電子顕微鏡で変異株の形状を観察した。その結果、tolC欠損株は、直接Aap分泌に影響を与えなかったが,tolC欠損株およびaatA・tolC欠損株ともに,培養中の凝集性が明らかに低下した。付着試験では,tolC欠損株の浮遊細胞数は野生株に比べて有意に多く,付着菌数は有意に少なかった。Complement株の凝集付着性は,野生株と同程度に回復した。Transwell assayでは,tolC欠損株の付着能低下が野生株との共培養で回復した。走査電顕では、変異株において線毛による菌の凝集の程度が低下していた。TolCはEAECの凝集付着を促進し,可溶性の凝集付着因子を外膜外へ排出し、線毛機能を修飾している可能性がある。TolCが凝集付着に関与するという報告はこれまでなく,EAECの病原性に関与する新たなTolCの役割が明らかになったと考えられる。
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