| 研究課題/領域番号 |
17591100
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
舘 延忠 札幌医科大学, 保健医療学部, 助教授 (80136944)
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| 研究分担者 |
山下 利春 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (50167706)
小塚 直樹 札幌医科大学, 保健医療学部, 助教授 (90225459)
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| キーワード | SMARD 1 / IGHMBP2遺伝子 / 983delAAGAA IGHMBP2 cDNA / 培養ラツト神経細胞 / 遺伝子導入 |
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| 研究概要 |
Spinal muscular atrophy with respiratory distress(SMARD)は、早期より横隔膜神経麻痺による呼吸不全を呈すよりspinal muscular atrophy type 1(Werdnig-Hoffmann病)と臨床的に区別される。最近、この疾患の原因遺伝子としてimmunoglobulin mu-binding protein 2(IGHMBP2)遺伝子変異が同定された。この遺伝子はnmdマウスの原因遺伝子と同じである。我々は、本邦で最初のIGHMBP2遺伝子変異が確認された3家系のSMARD1を経験した。平成17年度は変異IGHMBP2 cDNAの作製と神経細胞の培養系を確立した。
変異IGHMBP2 cDNAの作製:Human IGHMBP2 cDNA(hS μ BP2)は、京都大学免疫ゲノム医学講座の本庶佑教授より供与されたのを用いた。Human IGHMBP2 cDNAを使用し、PCRによるsite-directed mutagenesis法を用い983delAAGAA(frame shift mutationにより下流にstop codonを生じる)の変異IGHMBP2 cDNAを作製しシークエンスで確認した。
培養神経細胞の作製:16日の胎児ラツトの後根神経節をとりだしトリプシンで処理して培養した。最初の2日間は血清を含む培地にて、その後30日は無血清でMEM培地にて培養した。髄鞘形成は坑Po抗体を用いて確認した。
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