神経芽腫におけるBMP応答性とDANおよびp53ファミリー遺伝子等の機能的役割

2006 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 17591128
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 千葉県がんセンター(研究所)
• 研究代表者: 中村 洋子 千葉県がんセンター(研究所), 生化学研究部, 上席研究員 (60260254)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2006
• キーワード: 神経芽腫 / p53 / 細胞増殖抑制 / BMP

研究概要

目的:神経芽腫はp53遺伝子の変異がほとんど認められない腫瘍の一つである。しかし、最近の報告では、神経芽腫の約2%にp53の変異が存在することが判った。我々の研究においても神経芽腫細胞株30種類のうち6種類において機能消失したp53の変異を認めた。その中で、SK-N-ASはN-mycの増幅および1p lossがないにも関わらず薬剤耐性を示した。神経芽腫のBMPあるいはシスプラチン等に対する反応性ならびにp53等の関与を検討した。特に、SK-N-ASの新しいp53の構造を見出しその機能解析を行った。
方法および結果:SH-SY5YおよびSK-N-ASを用いてシスプラチン処理による変化をMTTアッセイ、TUNEL染色およびFACScanにより検討したところ、SH-SY5Yはシスプラチン処理により細胞死が誘導されることが判ったが、SK-N-ASは、細胞死は誘導されず細胞増殖抑制が認められた。次に、シスプラチン処理によるp53およびその下流遺伝子の解析を行った。SH-SY5Yはシスプラチン処理によりp53,p21^<WAF1>,Bax,PUMAの発現誘導、p53の15番目のセリンのリン酸化が認められたが、SK-N-ASはp21^<WAF1>の発現増加のみであった。SK-N-ASをBMP処理した場合も細胞死は認められず、細胞増殖抑制が誘導された。SK-N-ASのp53の構造をRT-PCR法、PCR法およびアレーCGH法によって解析した。その結果、核移行配列を含むC末端のホモ欠失が示唆された。C末端欠失のp53を作成し、SK-N-ASに過剰発現させp53の細胞内局在性を検討した。導入された変異型p53は核には殆ど認められなかった。以上の結果から、SK-N-ASの新しいタイプのp53(ホモ欠失)を見出し、神経芽腫のp53ステイタスによりシスプラチンに対する反応性(細胞死あるいは細胞増殖抑制)が異なる可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Functional characterization of a new p53 mutant generated by homozygous deletion in a neuroblastoma cell line. (2007)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Y, et al.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 354 ページ: 892-898
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Functional characterization of anew p53 mutant generated by homozygous deletion in a neuroblastoma cell line. (2007)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Y, Ozaki T, Niizuma H, Ohira M, Kamijo T, Nakagawara A.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 354 ページ: 892-898
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] High expression of N-acetylglucosaminyltransferase V in favorable neuroblastomas : Involvement of its effect on apoptosis. (2006)
  • 著者名/発表者名: Inamori K., Nakamura Y., et al.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 580 ページ: 627-632
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Bcl-2 is a key regulator for the retinoic acid-induced apoptotic cell death in neuroblastoma (2006)
  • 著者名/発表者名: Niizuma H., Nakamura Y., et al.
  • 雑誌名: Oncogene ページ: 5046-5055
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] High expression of N-acetylglucosaminyltransferase V in favorable neuroblastomas : Involvement of its effect on apoptosis. (2006)
  • 著者名/発表者名: Inamori K, Gu J, Ohira M, Kawasaki A, Nakamura Y, Nakagawa T, Kondo A, Miyoshi E, Nakagawara A, Taniguchi N.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 580 ページ: 627-632
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Bcl-2 is a key regulator for, the retinoic acid-induced apoptotic cell death in neuroblastoma. (2006)
  • 著者名/発表者名: Niizuma H, Nakamura Y, Ozaki T, Nakanishi H, Ohira M, Isogai E, Kageyama H, Imaizumi, Nakagawara A.
  • 雑誌名: Oncogene 25 ページ: 5046-5055
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] topors, a p53 and topoisomerase I-binding RING finger protein, is a coactivator of p53 in growth suppression induced by DNA damage (2005)
  • 著者名/発表者名: Lin L., Nakamura Y., et al.
  • 雑誌名: oncogene 24 ページ: 3385-3396
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expression profiling using a tumor-specific cDNA microarray predicts the prognosis of intermediate risk neuroblastomas (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohira M., Nakamura Y., et al.
  • 雑誌名: Cancer Cell 7 ページ: 337-350
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] A review of DNA microarray analysis of human neuroblastomas. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohira M., Nakamura Y., et al.
  • 雑誌名: Cancer Lett. 228 ページ: 5-11
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] topors, a p53 and topoisomerase I-binding RING finger protein, is a coactivator of p53 in growth suppression induced by DNA damage. (2005)
  • 著者名/発表者名: Lin L, Ozaki T, Takada Y, Kageyama H, Nakamura Y, Hata A, Zhang JH, Simonds WF, Nakagawara A, Koseki H.
  • 雑誌名: Oncogene 24 ページ: 3385-3396
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Expression profiling using a tumor-specific cDNA microarray predicts the prognosis of intermediate risk neuroblastomas. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohira M, Oba S, Nakamura Y, Isogai E, Kaneko S, Nakagawa A, Hirata T, Kubo H, Goto T, Yamada S, Yoshida Y, Fuchioka M, Ishii S, Nakagawara A.
  • 雑誌名: Cancer Cell 7 ページ: 337-350
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A review of DNA microarray analysis of human neuroblastomas. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ohira M, Oba S, Nakamura Y, Hirata T, Ishii S, Nakagawara A.
  • 雑誌名: Cancer Lett. 228 ページ: 5-11
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より