研究課題/領域番号 |
17591158
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研究機関 | 千葉大学 |
研究代表者 |
小林 孝志 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (90234830)
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研究分担者 |
輪千 浩史 星薬科大学, 薬学部, 助教授 (50318614)
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キーワード | ジェラティネイス / 炎症 / matrix metalloproteinase / MMP-9 / TIMP-2 / leptomycin B / decoy oligonucleotide / KRE-M9 |
研究概要 |
ジェラティネイス活性が皮膚の炎症病態に関わることが知られてきており、本活性を司るmatrix metalloproteinase (MMP)-2および9、tissue inhibitor of metalloproteinases(TIMP)-1および2の発現制御に関して検討を行った。 1.核外輸送制御分子、leptomycin B(LMB)投与治療についての検討 皮膚培養細胞へのLMBの添加で炎症惹起刺激時を含めMMP-2と比較してMMP-9発現を抑制、TIMP-1と比較してTIMP-2発現を誘導した。また紫外線照射マウス皮膚へのLMBの局所投与により、異常角化、浮腫、炎症性細胞浸潤の抑制を認め抗炎症効果を実証した。さらに本炎症惹起皮膚でのMMP-9発現亢進とLMBによる発現抑制を確認した。 2.Decoy oligonucleotide(ON)遺伝子導入ついての検討 MMP-9遺伝子プロモーター中のKRE-M9領域についてのdecoy ONを培養細胞に遺伝子導入、KRE-M9の置換配列ON導入と比較してMMP-9発現の亢進を確認した。 3.KRE-M9結合蛋白発現制御によるMMP-9発現制御についての検討 Biotin標識KRE-M9 ONとstreptavidin-Sepharoseを用いて、KRE-M9結合核蛋白を精製、SDS-PAGEのbandからアミノ酸配列を決定、MMP-9発現に抑制的に働くと考えられるdifferentiation repressing factor(DRF)-1の性状を検討した。結果、抗DRF-1抗体によるgel shiftでのsuper-shift、分化時角化細胞でのDRF-1の分解、表皮顆粒層を中心に分解DRF-1の局在を認めた。またDRF-1に対するRNA interferenceでのMMP-9発現亢進を確認した。
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