強皮症皮膚線維芽細胞におけるコラーゲン遺伝子転写制御・情報伝達の研究

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17591161
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 尹 浩信 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (20282634)
• キーワード: collagen / トロンボスポンジン-1 / TGF-β / 情報伝達 / 転写制御

研究概要

正常および強皮症培養線維芽細胞を用いて免疫ブロット法、免疫沈降法にてトロンボスポンジン-1(TSP-1)蛋白の発現量を検討したところ強皮症線維芽細胞において発現が亢進していた。Northern blot法にて強皮症線維芽細胞においてTSP-1 mRNAの発現が亢進していた。皮膚組織を用いた免疫染色法にて強皮症線維芽細胞におけるTSP-1の発現亢進がin vivoで確認された。また強皮症線維芽細胞ではNorthern blot法にてTSP-1 mRNA stabilityが亢進している事が示され、またTSP-1遺伝子プロモーター領域を用いたCAT assayにて強皮症線維芽細胞ではTSP-1遺伝子転写活性は亢進していなかった。TSP-1の過剰発現はI型コラーゲン過剰発現、Smad3のリン酸化亢進と相関した。また正常線維芽細胞においてTGF-β刺激にてTSP-1発現が促進され、強皮症線維芽細胞ではTSP-1の過剰発現はTGF-β中和抗体あるいはTGF-β1アンチセンスオリゴにて抑制され、autocrine TGF-β signaling(強皮症線維芽細胞自身が分泌するTGF-βが活性化してTGF-β情報伝達が亢進した結果)によるものと考えられた。またTSP-1中和抗体あるいはTSP-1アンチセンスオリゴにて強皮症線維芽細胞コラーゲン発現亢進、Smad3のリン酸化亢進が抑制され、強皮症線維芽細胞におけるautocrine TGF-β signalingにTSP-1過剰発現が関与していると考えられた。
さらに強皮症線維芽細胞におけるTSP-1発現亢進のTGF-β情報伝達系活性化への関与について明らかにするため、エレクトロポレーション法を用いて皮膚線維芽細胞にTSP-1を過剰発現した細胞(stable transfectants)を作成し、実際TSP-1を過剰発現しているか免疫ブロット法、Northern blot法にてTSP-1の蛋白質、mRNAレベルの発現量を検討するところである。

研究成果

• [雑誌論文] Upreaulation of tenascin-C expression by IL-13 in human dermal fibroblasts via the phosphoinositide 3-kinase/ Akt and protein kinase C signaling pathways (2006)
  • 著者名/発表者名: Jinnin M, Ihn H, Asano Y, Yamane K, Trojanowska M, Tamaki K
  • 雑誌名: J invest Dermatol 126 ページ: 551-560
• [雑誌論文] Increased expression of intgrin αvβ5 induces the myofibroblastic differentiation of dermal fibroblasts (2006)
  • 著者名/発表者名: Asano Y, Ihn H, Yamane K, Jinnin M, Tamaki K
  • 雑誌名: Am J Pathol 168 ページ: 499-510
• [雑誌論文] Characterization of SIS3, a novel specific inhibitor of Smad3,and its effect on transforming growth factor-β1-induced extra cellular matrix expression (2006)
  • 著者名/発表者名: Jinnin M, lhn H, Tamaki K
  • 雑誌名: Mol Pharmacol 69 ページ: 597-607
• [雑誌論文] Constitutive phosphorylated Smad3 interactes with Sp1 and p300/CBP in scleroderma fibroblasts (2006)
  • 著者名/発表者名: Ihn H, Yamane K, Asano Y, Jinnin M, Tamaki K
  • 雑誌名: Rheumatology 45 ページ: 157-165
• [雑誌論文] Platelet derived growth factor induced tenascin-C transcription is phosphoinositide 3-kinase/ Akt-dependent and mediated by Ets family transcription factors (2006)
  • 著者名/発表者名: Jinnin M, Ihn H, Asano Y, Yamane K, Trojanowska M, Tamaki K
  • 雑誌名: J Cell Physiol 206 ページ: 718-727
• [雑誌論文] Increased expression of integrin αvβ3 contributes to the establishment of autocrine TGF-β signaling in scleroderma dermal fibroblasts (2006)
  • 著者名/発表者名: Asano Y, Ihn H, Yamane K, Jinnin M, Mimura Y, Tamaki K
  • 雑誌名: J Immunol 175 ページ: 7708-7718