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2005 年度 実績報告書

強皮症硬化機序の解析とHGF遺伝子プラスミドを用いた遺伝子療法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 17591162
研究種目

基盤研究(C)

研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

西岡 清  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 客員教授 (20077647)

研究分担者 横関 博雄  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (90210608)
佐藤 貴浩  東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教授 (30235361)
キーワード強皮症 / HGF / TGF-b / 遺伝子療法 / モデルマウス / 膠原病 / 肺線維症
研究概要

強皮症モデルマウス皮膚におけるヒトHGF遺伝子プラスミド投与による皮膚硬化に対する効果とサイトカイン、ケモカイン、蛋白分解酵素の動態の検討
(1)HGF遺伝子プラスミド投与による皮膚硬化抑制の解析
ブレオマイシン(BLM)をC3Hマウスに4週間、連日皮下注射し硬化を誘導した。その後、ヒトHGF cDNA (2.2Kb)をVector plasmidに挿入後、HJV-liposomeに組み込み10mcg/mouse筋肉内に2週間ごとに2回投与しPBSを筋肉内に投与した群と4週間後に比較検討した。BLM最終投与4週間後に、背部皮膚を切除し組織学的に検討する。一部の実験ではホルマリン固定した組織標本において、H&E染色以外にトルイジンブルー、ギムザ、コンゴレッド染色を各々施行し、硬化病変部における皮膚の厚さと結合織の変化を検討。また、皮膚ハイドロキシプロリン量をWoessnerの方法を用いて測定。その結果、HGF cDNA投与群では皮膚の厚さ結合織の効果さらに、human HGFがmRNA、蛋白レベルで発現しているかを明らかにするため皮膚、肺、筋肉、腎臓などの臓器の抽出液および血清よりRT-PCR法、ELISA法を用いて測定する。HGFの発現分布を検討するため、硬化が低下していた。ヒトHGF抗体を用いて免疫組織化学的に検討したところplasmid投与群では明らかに増強がみられた。さらに、皮膚におけるTGF-β1の発現レベルを測定するためELISA, RT-PCR法を用いてmRNA,蛋白レベルで定量比較したところHGF-plasmid投与群ではTGF-β1の発現レベルが低下していた。今後、肺線維症におけるHGF-plasmidの効果を検討する。
(2)HGF遺伝子によるサイトカインの動態の検討
HGF遺伝子プラスミドあるいはコントロールプラスミドを投与した強皮症マウスの皮膚をそれぞれ採取し、発現されているサイトカイン(TGF-β,PDGF, CTGF, IL-6, IL-4, IL-5, bNGFなど)をRT-PCR法と免疫組織法を用いて検討する。HGF投与してそれぞれに皮膚におけるサイトカイン発現を検討し、主要な役割をはたすサイトカインを検出したところTGF-bは減少していた。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2005

すべて 雑誌論文 (6件)

  • [雑誌論文] Increased expression of p53 and p21 (waf1/Cip1) in lesional skin of bleomycin-induced scleroderma.2005

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto T, Nishioka K
    • 雑誌名

      Arch Dermatol Res 296(11)

      ページ: 509-513

  • [雑誌論文] Plasminogen activator inhibitor-1 is elevated, but not essential, in the development of bleomycin-induced murine scleroderma.2005

    • 著者名/発表者名
      Matsushita M, Yamamoto T, Nishioka K
    • 雑誌名

      Clin Exp Immunol 39

      ページ: 429-438

  • [雑誌論文] Humanized anti-interleukin-6 receptor antibody treatment of multicentric Castleman disease.2005

    • 著者名/発表者名
      Nishimoto N, Kanakura Y, Nishioka K, Kishimoto T et al.
    • 雑誌名

      Blood 106(8)

      ページ: 2627-2632

  • [雑誌論文] Synthesis of α (1,3) fucosyltransferases IV-and VII-dependent eosinophil selectin ligand and recruitment to the skin.2005

    • 著者名/発表者名
      Satoh T, Kanai Y, Wu M-H, Yokozeki H, Nishioka K et al.
    • 雑誌名

      Am J Pathol 167(3)

      ページ: 787-796

  • [雑誌論文] Basophils play a critical role in the development of IgE-mediated chronic allergic inflammation independently of T cells and mast cells.2005

    • 著者名/発表者名
      Mukai K, Matsuoka K, Taya C, Suzuki Yokozeki H, Nishioka K
    • 雑誌名

      Immunity; 23(3)

      ページ: 191-202

  • [雑誌論文] Multiple cutaneous fibrous histiocytoma in association with systemic lupus erythematosus.2005

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto T, Sumi K, Yokozeki H, Nishioka K
    • 雑誌名

      J Dermatol 32

      ページ: 645-649

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公開日: 2007-04-02   更新日: 2016-04-21  

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