| 研究課題/領域番号 |
17591319
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
堀口 淳 群馬大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (70272242)
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| 研究分担者 |
岩崎 俊晴 群馬大学, 大学院医学系研究科, 講師 (80375576)
竹下 章 沖中記念成人病研究所, 研究員 (20322646)
鯉淵 幸生 群馬大学, 医学部, 助手 (10323346)
鯉淵 典之 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80234681)
飯野 佑一 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (50124649)
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| キーワード | 乳癌 / SXR / ER / corepressor / SMRT |
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| 研究概要 |
乳癌組織にはエストロゲン受容体(ER)をはじめとしていくつかの核内ホルモン受容体が発現している。近年、タモキシフェン(TAM)をはじめとした60%以上の処方薬が結合するといわれているステロイド アンド ゼノバイオティック受容体(SXR)が発現することが報告された。SXRが活性化されると、チトクロームP450(CYP)酵素の誘導を介してその薬剤自体の分解を促進する。我々はレポーターアッセイを行い、SXRはER-EREの転写を用量依存性に活性化する作用があることを明らかとした。この機序を解析する目的でまず、ER-SXRの結合についてin vivoのタンパクータンパク結合実験であるMammalian two-hybrid assay(MTA)を、SXR-ERE(estrogen response element)の結合についてin vitroのタンパクーDNA結合実験であるゲルシフト法を用いて検討したが、いずれも結合は認められなかった。また、ER-steroid receptor coactivator(SRC)-1の結合に変化はなかった。SXRにリガンド依存性にコリプレッサーであるSMRTが結合することに注目し、GST pull down法、MTAを行ったところ、SXRは用量依存性にER-SMRTの結合を減弱させた。さらに、新規に開発したアッセイ系(Liquid fluorescent DNA pull downassay)を用いて、同様の結果を得た。また、乳癌細胞MCF7細胞にSXRを遺伝子導入し、E2添加後、RNAを抽出し、リアルタイム定量RT-PCR法を用いて解析したところ、SXR用量依存性にE2の標的遺伝子であるプロゲステロン受容体(PgR)のmRNA発現が増加した。一方、ER及びSMRTの発現は変化なかった。以上から、SXRとSMRTが結合しERからSMRTが解離することによりERの転写が活性化することが示唆された。
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