| 研究課題/領域番号 |
17591511
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
泉本 修一 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (40324769)
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| 研究分担者 |
橋本 直哉 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (90315945)
丸野 元彦 大阪府立成人病センター(研究所), 特別研究員 (10263287)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 遺伝子 / 蛋白質 / TAT蛋白 / 血液脳関門 / 悪性グリオーマ |
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| 研究概要 |
TAT-PTDとヒト型インターフェロンβ(HuIFN-β)の融合タンパクを作成し、それが血液脳関門を貫通し脳実質内腫瘍細胞に直接到達することにより新規悪性グリオーマの治療法として成立するかどうかを検討した。まず、TAT-PTDならびにHis-tagがHuIFN-βのC末端に付加されるようにRT-PCRを行い、遺伝子配列が一致していることをシークエンスにより確認、それを大腸菌に形質転換させ遺伝子発現、大腸菌の大量培養により発現タンパク質を取得し、それを精製した。13種類の界面活性剤で比べるとSB3-14を持いた可溶化が効率よく、最終的にSB3-14を用いたカラム内リフォールディング、イミダゾールによる溶出を経てSDS-PAGEの結果より可溶化が確認された。すなわちSB3-14を用いたカラム法でのみTAT-PTDとHuIFN-βの融合タンパク(TAT-HuIFN-β)の可溶化が可能であった。コントロールとして、TAT-PTDをHAに融合させたものをラット腹腔内投与した後、その脳組織を免疫染色することにより高濃度でTAT-PTD-HA融合タンパクが脳組織内に移行することを検討し、TAT-PTDは融合タンパクの脳組織内移行手段として確実に有効であることを検証した。つぎにTAT-HuIFN-βの溶解物をラット腹腔内に注射し脳組織内に移行するか否かを検討した。しかしながら、脳組織内には免疫組織学的にあるいは免疫細胞学的に無投与脳とくらべ有意な差をもったHuIFN-βの移行が確認できず、濃度を変えても同様であった。よってTAT-HuIFN-βについては血液脳関門を貫通し脳実質内あるいは脳内腫瘍細胞に直接到達することは困難であり、脳腫瘍治療に応用することは難しいと考えられた。
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