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本研究は原因不明の慢性炎症性疾患である関節リウマチの滑膜炎の新規治療法として転写因子NF-κBの抑制分子であるIκBβ2を内因性に制御することにより確立しようとするものであり、平成17年度から平成18年度の2年間で計画されている。本年度は、2年目にあたり、初年度で検討した1)NF-κBとIκBファミリーの活性化と発現の検討。2)NF-κB活性化におけるIκBβ2の役割の検討。3)各疾患におけるIκBファミリーの細胞内安定性の検討。4)IκBβ2mRNAにおけるRNA結合蛋白の同定と機能解析、について、さらに詳細に解析した。
その結果、関節リウマチ患者滑膜細胞で低下していたIκBβ2の発現低下はmRNAレベルで調節されており、その作用は転写後のmRNAの安定性に依存していることが明らかになった。すなわち、IκBβ1とIκBβ2の3'非翻訳領域とルシフェラーゼ遺伝子を融合させたキメラプラスミドを作成し滑膜細胞に導入し、それぞれのmRNAの半減期を測定したところ、IκBβ2の3'非翻訳領域を用いたルシフェラーゼmRNAが有意に延長していた。そこで、次に、正常、変形性関節症、関節リウマチから採取した滑膜細胞ヘキメラプラスミドを導入し、半減期を測定したところ、正常や変形性関節症滑膜細胞に比較して、関節リウマチ滑膜細胞で有意に短縮していた。従って、関節リウマチ滑膜細胞におけるIκBβ2蛋白の低下は、関節リウマチ滑膜細胞におけるIκBβ2mRNAの半減期の低下によることが明らかになった。一方、IκBβ2mRNA発現量を規定していると考えられる3'非翻訳領域を用いたRNA結合蛋白同定と機能解析について現在検討中であるが、正常あるいは変形性関節症滑膜細胞に比較して、関節リウマチ滑膜細胞では幾つかのRNA結合蛋白が減少あるいは欠損している可能性を示すデータが得られている。これらRNA結合蛋白の機能障害が容易にNF-κBを活性化させ滑膜炎を増幅させていることが示唆された。
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