| 研究課題/領域番号 |
17591584
|
|---|
| 研究機関 | 大分大学 |
|---|
研究代表者 |
松尾 哲孝 大分大学, 医学部, 助手 (10284788)
|
|---|
| 研究分担者 |
住吉 秀明 大分大学, 医学部, 助手 (60343357)
浜中 良志 大分大学, 医学部, 助手 (60274750)
吉岡 秀克 大分大学, 医学部, 教授 (00222430)
|
|---|
| キーワード | コラーゲン / 骨組織 / 転写 / 骨分化 |
|---|
| 研究概要 |
マウス24型コラーゲンα1鎖の発現調節機構を解析するために、まずこの遺伝子の全cDNA及びこの遺伝子のプロモーターに関与しているgDNAをクローニングした。次に、Oligo-Cap Race法によって、その転写開始領域を決定した。
次に、転写調節機構を解析するために、まず、RT-PCR法によって、培養細胞での発現を検討し、ラット骨芽細胞(ROS17/2.8)に発現していることを確認した。次に、ルシフェラーゼ遺伝子のコンストラクトを作製し、ROS細胞を用いてその基本プロモーター領域を決定した。
更に、基本プロモーター領域に関与する転写因子を調べるために、この領域のプローブを作製し、EMSAによりプロモーター活性に不可欠な領域を決定すると共に、その領域に結合する転写因子がCREB/ATFであることを同定した。
一方、組織発現に関しては、in situ hybridization用のプローブも作製し、マウスの発生段階でこの分子が骨組織に特異的に発現している事を見いだし、同様に、マウスおよびラットの培養細胞での発現も検討し、幾つかのosteoblast細胞にも発現している事も確認すると共に、未分化間葉系細胞を骨に分化させる事によって、XXIV型コラーゲンの発現を誘導することが出来た。
加えて、特異抗体の作製および大腸菌&培養細胞でのリコンビナントタンパクの発現も行い、タンパクレベルの発現も確認した。更に、海外研究協力者の元で、ノックアウトマウスを作成中である。
|
