| 研究概要 |
1)VEGFプロモーター遺伝子を組みこんだリポーターアッセイシステムの構築。
(ア)Hypoxia Inducible Factorの結合配列HREを組み込んだレポーター遺伝子の大量調整。
(1)pVEGF3.5:VEGF遺伝子プロモーター領域3.5kbを組み込んだもの。
(2)pVEGF0.4:VEGF遺伝子のプロモーター領域0.4kbを組み込んだもの。
(3)pVEGF HREx4:HRE配列を4回繰り返して合成したもの。
(イ)Hypoxia inducible factor関連遺伝子の大量調整。
(1)pCMV HIF1α: Hypoxia inducible factor 1α全長遺伝子
(2)pCMV HIF1α(delta ODD): Hypoxia inducible factor 1α全長遺伝子から低酸素依存分解ドメイン(ODD)を削除したもの。
(3)pTRE-EPAS: Hypoxia inducible factor 2α全長遺伝子。
(4)pARNT: Hypoxia inducible factor 1とDimerを形成する遺伝子。
2)HREおよびHypoxia inducible factor 1α翻訳領域を認識するヘアピンポリアミドを合成。
(ア)HRE1,HRE2,HRE3: HREを認識。
(イ)HIF1: Hypoxia inducible factor 1α翻訳領域を認識。
3)合成ヘアピンポリアミドのVEGF転写抑制能の評価。
(ア)HIF,レポーター遺伝子をヒト胎児腎上皮細胞293への遺伝子導入。
(イ)遺伝子導入細胞をポリアミドに暴露。
(ウ)結果:
(1)HRE1,HRE2,HRE3を同時に投与することでVEGFの転写は有意に抑制(Acta Oncologica in press)
(2)HIF1もVEGFの転写を抑制。
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