| 研究課題/領域番号 |
17591706
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
岩本 晃明 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (60046117)
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| 研究分担者 |
佐藤 陽子 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (50398963)
吉池 美紀 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 研究補助員 (60398964)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 糖 / 蛋白質 / 発生-分化 / 精子形成 / 精細胞培養系 |
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| 研究概要 |
現在までに造精機能障害を示すヒト精巣に特異的な現象である精細管基底膜の肥厚について検討を行い、肥厚した基底膜における糖蛋白質の存在を明らかにしてきた。本研究ではこの糖蛋白質及び糖蛋白質生成細胞の同定、糖蛋白質の機能解析ならびに細胞レベルでの糖蛋白質生成解析を行うためのヒト精巣由来細胞の樹立を目指した。
1)糖蛋白質の同定方法の検討:肥厚した基底膜に存在する糖蛋白のPNA-lectinにより認識されprogesteroneに吸着性があるという性質をもとに、精巣から抽出したサンプルを用いて2次元電気泳動により蛋白を分離しメンブレンに転写した。メンブレンをprogesterone(+、-)溶液でpre-incubation後、PNA-lectinと反応させた結果、多くのPNA-lectinに親和性を持つがprogesteroneに吸着しない糖蛋白質のスポットを除去することができた。目的の正確なスポットの検出を行うには、さらに設定条件の詳細な検討を行う必要がある。
2)ヒト精巣由来細胞樹立にむけての検討:pEGFp-lucをマーカーとして比較的増殖性のよい接着性のヒト精巣由来細胞及び、我々が確立した成熟マウス由来セルトリ細胞株(A31C4)に対し遺伝子導入を試みた。条件検討の結果、A31C4に対し遺伝子導入及が発現効率が最良であったHVJ-Eを用いた膜融合法は、ヒト精巣由来細胞に対して遺伝子導入効率が低く発現異常を示した。理由としてヒト精巣由来細胞の増殖能力が低いことが考えられた。次にA31C4とヒト精巣由来細胞との共培養により、ヒト精原細胞の維持及びヒトSertoli cellの増殖と維持を一定期間可能にした。ヒト精巣由来細胞樹立、及びヒト精細胞の分化増殖のin vitroでの再現に対し、この共培養系は大きく寄与するものと考えられる。
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