| 研究課題/領域番号 |
17591766
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
産婦人科学
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
森永 伴法 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (10351818)
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| 研究分担者 |
玉置 知子 (橋本 知子) 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (10172868)
辻 芳之 兵庫医科大学, 医学部, 非常勤講師 (60148658)
吉川 麗月 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (90319864)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 細胞周期 / M期 / 翻訳制御 / 遺伝子発現 / がん関連遺伝子 |
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| 研究概要 |
オーロラAの過剰発現は細胞分裂における娘細胞への染色体の均等な分配に異常をきたし、染色体の異数性を惹起することから、がんの原因の一つと考えられている。オーロラA発現の亢進したがん細胞では、そのmRNA量の増加に加えて、正常細胞のそれとは5'-非翻訳領域(5'-UTR)の長さの異なる複数のmRNA(isoform)が検出される。このようなmRNAisoformとオーロラAの発現に関連があるかどうかを明らかにする目的で、プロモーターに対する5'-UTRの影響を解析した。長さの異なるオーロラAcDNAの5'-UTRをPCRによって増幅し、pGL3-Basicベクター由来のホタル・ルシフェラーゼ遺伝子とphRL-CMVベクター由来のウミシイタケ・ルシフェラーゼ遺伝子の間に挿入してbicistronicvectorを構築した。これを培養がん細胞に導入してinternal ribosome entry site(IRES)依存の翻訳がおこるかどうかを検討した結果、IRES活性は確認されなかったが5'-UTRが上流シストロンの発現を抑制することがわかった。下流シストロンへの発現抑制作用は導入した細胞によって異なり、5'-UTRが複雑な調節機能を持っていることが示唆された。次に、5'-UTRをpGL3-Contro1ベクターのSV40プロモーター下流に挿入して遺伝子発現の変化を調べた結果、レポーター発現が強く抑制された。そこで5'-UTRのDNAを5'側と3'側から逐次削除し、発現抑制作用を示す二つの短い領域を同定した。これらの領域を、個別にpG-L3Contro1ベクターのSV40プロモーター上流、あるいは下流に挿入したところ、プロモーター下流に挿入した場合に発現抑制作用を示すことがわかった。さらに、5'-UTRにはプロモーター活性を示す領域があることも明らかとなった。
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