| 研究概要 |
自然突然変異系マウス:Lethal spotting(ls/ls)系、Piebald spotted(sl/sl)系およびDominant megacolon(Dom/Dom)系を免疫不全マウス維持管理環境下に準じたクリーン度に管理し維持した。消化管神経叢におけるニューロン・グリア細胞間シグナル伝達因子の発現動態解析として、各マウスより摘出した全消化管標本ならびに子宮より採取した胎仔を直ちに4%paraformaldehyde溶液(pH7.400)にて浸潤固定後、濃度勾配Sucrose溶液にて浸透圧プロテクトを施した上でO.C.T.compoundに浸し液化窒素下にて急速凍結させた。標本を組織架台にマウント後、凍結標本薄切装置にて10μm〜12μm厚の薄切、連続切片としてコーティングスライドグラスに貼付した。ここで腸管グリア細胞の特異的マーカーとしてGFAP及びS100α分子に対する抗体、ニューロン・グリア細胞間シグナル伝達因子のマーカーとしてRET,GDNF,SOX10,NGF,NGFR,SOX10,P2X7の各々に特異的親和性を有するマウスmonoclonal及び抗ウサギpolyclonal抗体(gene Bank及びcommercial baseにて入手)を反応させた。続いて、FITCないしRhodamineにて蛍光標識した二次抗体を反応させ蛍光抗体法にて分子の局在性を特定中である。即ち、これらの病態発生の原因となった遺伝子変異、消化管神経叢におけるニューロン・腸管グリア細胞間シグナル(RET,GDNF,SOX10,NGF,NGFR,P2X7 receptor)の発現変異との相関性について検討する実験系を確立した。
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