| 研究課題/領域番号 |
17591997
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
小山 徹 鹿児島大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教 (60233623)
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| 研究分担者 |
諏訪 素子 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (80206599)
徳田 雅行 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (20253891)
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| キーワード | 根尖病変 / MMP-1 / 遺伝子多型 / リスク診断 / Ets-1 |
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| 研究概要 |
Ets-1は、MMP-1発現において重要な役割を持つ転写因子である。また、MMP-1のプロモーター領域-1607での一塩基多型は、Ets-1の結合能に影響を及ぼすといわれている。そこで各種歯根膜細胞においてEts-1結合能を調べるため以下の実験を行った。
1.ヒト歯根膜細胞の培養
当研究室でストックしている数種の歯根膜細胞を、10%ウシ胎児血清を含むα-MEM(α-modified minimum essential Medium)で培養した。実験には継代数5〜10代までを用いた。コンフルエントに達した細胞は1%ウシ胎児血清を含むα-MEMで24h培養し、その後腫瘍壊死因子(TNF-α)で刺激した。
2.ゲルモビリティシフトアッセイによる転写因子Ets-1結合能の検討
培養細胞の核タンパクをDignamらの方法で抽出し、ゲルモビリティシフトアッセイを行った。すなわち、コンセンサスEts-1モチーフ(5'-AGTCGAGGAAGTGACTAACTG-3')を合成オリゴヌクレオチドプローブとして用いて、核タンパク抽出物のDNA結合活性を調べた。
以上より、次のような結果が得られた。
ヒト歯根膜細胞培養系において、TNF-αは転写因子Ets-1の活性化を誘導した。さらに、細胞の違い(個体差)による活性化の違いも確認できた。今後はルックアッセイにより、プロモーター活性の細胞間の違いを検討するとともに、high response群とlow response群の遺伝子解析をすすめていきたい。
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