| 研究課題/領域番号 |
17592063
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
外科系歯学
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
楠美 昭則 弘前大学, 医学部附属病院, 助手 (90332494)
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| 研究分担者 |
佐藤 寿 弘前大学, 医学部附属病院, 助手 (90311539)
榊 宏剛 弘前大学, 医学部附属病院, 助手 (90374850)
楠美 智巳 弘前大学, 医学部, 講師 (90322932)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 再生医学 / 細胞・組織 / ストレス / シグナル伝達 / 発現制御 / Regulation of expression |
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| 研究概要 |
1.ヒド骨芽細胞に対するCTS負荷による骨代謝調節因子産生の影響の解析
CTS負荷による正常骨・芽細胞からのOPG産生亢進、RANKL産生抑制は、P38MAPK阻害剤(SB250380)を用いてreal-time RT-PCR、ELISAの結果から、P38MAPK経路によるものと考えられた。さらに、CTS負荷により産生が亢進されるオステオポンチン(OPN)、Cox-2、一酸化窒素(Nitricoxide、NO)については、OPN、Cox-2 mRNA発現、NO産生は、CTSにより亢進した。
2.ヒト骨芽細胞に対するCTS負荷によるシグナル伝達経路の解析
シグナル伝達経路の解析は、申請当時の解析方法が進化し、DNA array法としてSentrix^<TM>Human-6 Expression BeadChip(モリテックス社)を用いた。結果、正常ヒト骨芽細胞内ではCTS負荷に関与する遺伝子は、Rasの他、TNFレセブターfamily、チューブリンfamilyなどであった。骨形成に関与する核内転写因子(NF-κB、Runx2/Cbfal、Osterix、Msx、Dlx5、Smadファミリー等)については、DNA arrayでは特に変化は認められなかった。
3.CTS負荷された、当大学樹立マウス骨腫瘍由来細胞株NHOSの解析
動物実験施設内で害虫が広範囲で発生し、駆除のため施設の閉鎖の時期が長く実験できなかった。
4.CTS負荷による骨芽細胞とRas遺伝子関与
OPG産生は、骨芽細胞を継代し続けると産生能は亢進するが、CTS負荷したするとOPGは第一継代ではCTS負荷により誘導されるが、第三継代ではOPG産生が抑制される。sRANKL産生では第一第三継代では有意差は認められなかったが、RANKL mRNAの発現では、第一継代では、CTS負荷でRANKL発現が抑制され、第三継代では、RANKL発現が増強された。OPN、Cox-2 mRNA、NO産生は、継代にかかわらずCTS負荷で産生・発現は誘導された。MAPK解析では、第一継代で、CTS負荷後15分でD38MAPK活性化、ERKl/2は不活化し、第三継代ではP38MAPK活性化、ERK1/2の不活性化した。
5.結論
この2年の本研究は、ヒト骨芽細胞の解析に集中することで大きな発見があり、今後の研究に更なる飛躍が期待できるものとなった。
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