| 研究概要 |
歯根吸収は破歯細胞が,セメント質及び象牙質を吸収することにより起こる現象である.そこで,実験的歯の移動における破歯細胞の発現様相ならびに増殖,分化,抑制に関与する因子について検討した.6週齢の雄性ICRマウスを用い,バルビツレートによる腹腔内麻酔の後,切歯に0.012inchのNickel-Titaniumの矯正用ワイヤーを光重合レジンにて固定し,上顎右側第一臼歯を口蓋側に移動させた.歯の移動開始から,2,6,12時間,1,2,3,5,7,14,28日後に,4%パラホルムアルデヒドで灌流固定し,エチレンジアミン4酢酸で脱灰した.アルコール脱水したものをパラフィン包埋後し,ミクロトームにて5μmの矢状断および水平断薄切切片を作成した.脱パラフィン後,Hematoxilin-Eosin(H-E)染色,酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ(TRAP)染色を用いて,破歯細胞の発現様相を経時的に観察した.Connective Tissue Growth Factor(CTGF), Cbfa1,Osteopontin(OPN), Osteocalcin(OSC), Collagen type IのRNAプローブを用いてin situ hybridyzation法を行い,mRNAの発現部位を光学顕微鏡にて検鏡し,それぞれの経時的変化を検討した.プローブはdig-UTPでラベリングし,ハイブリダイゼーション後の反応物の可視化はNTP/BCIPにて行った.同様の因子に対して,ABC法による免疫組織化学染色を行い,各因子のタンパク発現と局在を検索した.これらの結果から,本実験系においては破歯細胞が歯の移動から5日及び7日で,もっとも多く観察されることが明らかとなった.また破歯細胞の増殖,分化,抑制にOPN及びCTGFが関与している可能性が示唆された.
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