| 研究課題/領域番号 |
17592140
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
矯正・小児系歯学
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
香西 克之 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (10178212)
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| 研究分担者 |
鈴木 淳司 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助教授 (90263714)
菅井 基行 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (10201568)
小松澤 均 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助教授 (90253088)
吉村 剛 広島大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助手 (50403530)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | ミュータンス菌 / 齲蝕 / 溶菌酵素 / 口腔レンサ球菌 |
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| 研究概要 |
齲蝕の原因菌はStreptococcus mutans(ミュータンス菌)とStreptococcussobrinus(ソブリヌス菌)である。我々は昨年度までに、ミュータンス菌の産生するペプチドグリカン加水分解酵素(Aml)がミュータンス菌とソブリヌス菌に対し、菌種特異的に溶菌活性を示すことを明らかにし、齲蝕抑制物質としての可能性を見いだしている。今年度我々は、Amlのリコンビナント大量精製の実験系を確立し、得られたAmlリコンビナント蛋白を用いて、溶菌酵素活性に影響を与える因子について検討を行った。また、確立した溶菌酵素活性評価系を用いて、小児口腔より分離した臨床分離株に対するAmlの溶菌酵素活性について検討を行った。
近年、ミュータンス菌の全塩基配列が明らかになったので、Amlについての遺伝子配列をN末端アミノ酸シークエンスならびに遺伝子配列から明らかにした。得られた配列をもとに遺伝子組み替え蛋白を作り、精製を行った。その結果、1literの培養液から約1mgの精製蛋白が得られた。
得られた蛋白を用いて、活性に影響を与える因子について検討を行った。その結果、組み替え蛋白はpH7付近、37℃の条件下で安定的に使用できた。そして、Amlは陽イオンの影響下に有り、特にCa^<2+>、Na^+の影響を受けた。その他には非イオン性の界面活性剤であるtriton X-100存在下において最も活性が高くなる事が明らかとなった。
以上の結果をもとに、Amlの酵素活性が最も向上する条件の緩衝液を作成し(lysis buffer:0.1Mリン酸緩衝液、0.1M NaCl、0.1mM CaCl2、0.1% triton X-100)、小児口腔から分離したミュータンス菌39株、ソブリヌス菌9株を被験菌株に用い、最終濃度が10μg/mlのAmlを添加して、臨床分離株に対する溶菌活性について検討を行った。その結果、Amlは、臨床より分離されたミュータンス菌、ソブリヌス菌に対し、広範的に強い溶菌反応を示した。しかし、株間における感受性の差は、ミュータンス菌およびソブリヌス菌の混合感染の有無や酸産生能などの、齲蝕リスクと関与する項目との相関関係は見られなかった。
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