| 研究課題/領域番号 |
17592166
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
中尾 寿美 日本大学, 松戸歯学部, 助手 (20102577)
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| 研究分担者 |
小方 頼昌 日本大学, 松戸歯学部, 教授 (90204065)
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| キーワード | カルシニューリン / 歯肉線維芽細胞 / 転写因子 / シクロオキシゲナーゼ / プロスタグランジンE2 / サクロスポリンA |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、歯肉線維芽細胞におけるサイトカインによる細胞外マトリックス産生とプロスタグランジンE_2産生について、カルシニューリンに焦点をあて検討を行うことである。カルシニューリンは脱リン酸化酵素のひとつで、免疫抑制剤であるサイクロスポリンAの標的分子であり免疫疾患の病態を理解する上で重要な因子である。平成17年度は、サイクロスポリンAを用いプロスタグランジンE_2産生機序について検討を行った。
1.プロスタグランジンE_2産生
歯肉線維芽細胞にサイクロスポリンAを作用させプロスタグランジンE_2量をELISA法により測定した。サイクロスポリンAは単独で濃度依存的(0.1-5μM)および経時的(6-24時間)にプロスタグランジンE_2を産生した。また10μMでは抑制した。IL-1βによるプロスタグランジンE_2産生に対してはやや増強する傾向が認められた。
2.IL-1βによるによるプライミグにおよぼす効果
IL-1βを長時間作用させた後、ブラジキニンを作用させると多量のプロスタグランジンE_2が産生されるが、ここで同時にサイクロスポリンAを作用するとプライミング効果はさらに増強された。
3.シクロオキシゲナーゼー-2mRNA発現
プロスタグランジンE_2産生酵素であるシクロオキシゲナーゼー-2mRNA発現をRT-PCR法により測定した。サイクロスポリンAではシクロオキシゲナーゼー-2mRNA発現が認められ、IL-1βによる発現に対しては増強傾向を示した。
4.シクロオキシゲナーゼー-2タンパク発現
シクロオキシゲナーゼー-2タンパク発現をウエスタンブロッティング法により測定した。サイクロスポリンAによりシクロオキシゲナーゼー-2タンパク発現が認められ、IL-1βによる発現に対しては増強傾向を示した。
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