| 研究課題/領域番号 |
17658040
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
清水 昌 京都大学, 農学研究科, 教授 (70093250)
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| 研究分担者 |
櫻谷 英治 京都大学, 農学研究科, 助手 (10362427)
小川 順 京都大学, 農学研究科, 助手 (70281102)
片岡 道彦 京都大学, 農学研究科, 助教授 (90252494)
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| キーワード | Single Cell 0il / 構造脂質 / トリアシルグリセロール / Mortierella alpina / ジアシルグリセロール / 高度不飽和脂肪酸 / リパーゼ / triarachidonyl glycerol |
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| 研究概要 |
近年、ジアシルグリセロール(DG)は、その特異な栄養機能から新規機能性脂質として注目を集めている。そこで、高度不飽和脂肪酸含有トリアシルグリセロール(TG)を高生産する油糧微生物Mortierella alpina 1S-4株からジアシルグリセロールを特異的に蓄積する変異株の取得を試みた。野生株1S-4に変異処理を施した菌体からBligh-Dyer法により脂質を抽出した後、薄層クロマトグラフィー(TLC)と高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析するという2段階のスクリーニングを行った。その結果、脂質中のTGの割合が少なく、DGの含有量が高い変異株(KY1株)を取得した。2%グルコース、1%酵母エキスの液体培地にて、28℃、8日間培養して得られた変異株と親株1S-4について、TLCにてTG、DG、遊離脂肪酸、極性脂質(PL)を分画し、経時的に定量分析したところ、培養6日目にKY1株ではDG量が乾燥菌体1gあたり8.8mgに達し、同じ培養日数における親株のDG量(1.1mg/g乾燥菌体)を大きく上回った。また、PLも親株より多くなっており、親株の総脂質中のPL含有率は10%以下であるのに対し、KY1株においては培養8日目にPLが総脂質の35%に達した。なお、各脂質成分中の脂肪酸組成を分析したところ、親株とKY1株の間に大きな違いは見られなかった。KY1株は高度不飽和脂肪酸含有率の高いDGの生産に適した変異株であると考えられた。
TGのacidolysisならびにglyceride synthesisによるグリセロールへの特異的脂肪酸の導入に有用なリパーゼの探索を行った結果、Pseudomonas fluoresoens HU380株、ならびに、P.flucresoens AK102株にユニークな脂肪酸特異性を示すリパーゼを見いだした。
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