| 研究概要 |
本研究計画は、非小細胞肺癌に対するイレッサ(ゲフィチニブ)の分子標的抗腫瘍効果の関連性が指摘されているEGFR遺伝子のキナーゼ領域(エクソン18,19,20および21)において多発する腫瘍特異的変異(塩基置換点または十数塩基対の欠失)の分子機序を解明することである。一般に、特異的な部位または領域に塩基置換が多くみられるようなホットスポット領域は、小さな塩基対のスリップ構造を形成する配列が存在することが知られている。一方、エクソン19における12〜18塩基対の欠失に対しては、何らかの非B-DNA型のDNA高次構造がその領域週辺に存在し、そのようなゲノムの不安定性に関与している可能性がある。以下、本研究計画で着目した2点につき、平成18年度に行った内容を記す。
1.EGFR遺伝子変異を引き起こすシス作用性DNA領域の探索
EGFR遺伝子変異領域内または近傍に遺伝的不安定性をもたらすシス作用性DNA領域、すなわち非B-DNA型のDNA高次構造の存在を探ることを目的として、平成17年度、EGFR遺伝子のキナーゼ領域またはそれら近傍イントロン領域に相当する様々な長さのDNA断片(100〜約2,000塩基対)をもつプラスミドを作成した。平成18年度は、これらプラスミドを様々な大腸菌宿主中で増殖させ、挿入配列を含むプラスミドDNAの安定性と複製回数や大腸菌種との関連性の検討、ならびに化学的または酵素学的検出方法により挿入領域における非B-DNA型構造の存在を検討した。
2.プロテオームならびにトランスクリプトーム的アプローチによる不安定性起因因子の探索
EGFR遺伝子の不安定性を起因する因子の探索を目的として、DNAマイクロアレイを用いたトランスクリプトーム解析により、種々の肺癌細胞の遺伝子発現レベルの検討を行った。さらに、プロテオーム解析を開始し、トランスクリプトーム解析の結果と合わせて、不安定性因子の探索を行う予定である。
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