2フォトン顕微鏡を用いたT細胞による細胞内寄生菌排除の生体内イメージング解析

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17659128
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 小出 幸夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30126809)
• 研究分担者: 永田 年 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (90275024) ; 青枝 大貴 浜松医科大学, 医学部, 助手 (10324344) ; ホルヘ セルバンテス 浜松医科大学, 医学部, COE研究員 (60377752)
• キーワード: 2フォトン顕微鏡 / 生体内イメージング / 細胞内寄生菌 / 脾臓 / 樹状細胞 / マクロファージ / T細胞

研究概要

脾臓は病原体の全身感染において、重要な防御機構を担っている。本研究の目的は、細胞内寄生菌(リステリア)の脾臓における防御機構を2フォトン顕微鏡を用いて生体内でイメージング解析することにある。具体的には1)リステリアの辺縁帯マクロファージ及び樹状細胞による捕捉、2)これらの細胞の脾臓内移動、3)リステリア特異的T細胞の感作、をイメージング解析する。本年度に得られた結果を以下に記す。
1.リステリア静脈内感染2時間後:CFSE標識したリステリアは辺縁帯に存在するが、この時点で辺縁帯マクロファージおよび樹状細胞に変化を認めなかった。
2.リステリア感染6〜12時間後:ほとんど全てのリステリアは辺縁帯および赤脾髄のマクロファージによって、捕捉された。
3.リステリア感染24時間後:興味あることにCFSE標識したリステリアは白脾髄および小動脈周囲リンパ鞘(PALS)のT細胞領域にのみ認められた。この間に、リステリアを捕捉した辺縁帯マクロファージおよびCD11c陽性樹状細胞がT細胞領域に移動することが観察された。特に、CD11c陽性樹状細胞は急速にPALS周囲に蓄積されることが判明した。これらの実験において、樹状細胞を検出するために、CD11c-eYFPトランスジェニック(Tg)マウスを、また、マクロファージをCD11b-GFP Tgマウスを用いた。
4.特異的T細胞の感作(今後の予定):本年度の結果から、辺縁帯でリステリアを捕捉した樹状細胞がPALSに移動して、T細胞を感作する可能性が考えられた。そこで、これを証明するため、OVA発現リステリア、OVA特異的CD8+T細胞受容体Tgマウス(OT-I)およびOVA特異的CD4+T細胞受容体Tgマウス(OT-II)を用いて生体内イメージング解析を行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Expression mapping by retroviral vector for CD8^+ T cell epitopes : definition of a Mycobacterium tuberculosis peptide presented by H2-D^d. (2005)
  • 著者名/発表者名: Aoshi T, Suzuki M, Uchijima M, Nagata T, Koide Y.
  • 雑誌名: J Immunol Methods 298(1-2) ページ: 21-34
• [雑誌論文] Interferon-γ overcomes low responsiveness of myeloid dendritic cells to CpG-DNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Uchijima M, Nagata T, Aoshi T, Koide Y
  • 雑誌名: Immunol Cell Biol 83 ページ: 92-95
• [雑誌論文] α-Galactosylceramide, a Ligand of Natural Killer T Cells, Inhibits Allergic Airway Inflammation (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsuda H, Suda T, Sato J, Nagata T, Koide Y, Chida K, Nakamura H
  • 雑誌名: Am J Respir Cell Mol Biol. 33(1) ページ: 22-31
• [雑誌論文] Immunization with gene encoding granulocyte-macrophage colony-stimulating factor inserted with a single helper T-cell epitope of an intracellular bacterium induces a specific T-cell subset and protective immunity.
  • 著者名/発表者名: Nagata T, Uchijima M, Uchiyama H, Yamada T, Aoshi T, Koide Y
  • 雑誌名: Vaccine (印刷中)
• [雑誌論文] Immunization with dentritic cells retrovirally transduced with mycobacterial antigen 85A gene elicits the specific cellular immunity including cytotoxic T-lymphocyte activity specific to a dominant epitope on Antigen 85A.
  • 著者名/発表者名: Nakano H, Nagata T, Suda T, Tanaka T, Aoshi T, Uchijima M, Chida K, Nkamura H, Okada M, Koide, Y
  • 雑誌名: Vaccine (印刷中)