ポリグルタミン病のCAGリピートは2本鎖様なって毒性をもつ

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17659260
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 久保寺 隆行 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, COE拠点形成特別研究員 (40376801)
• 研究分担者: 横田 隆徳 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (90231688)
• キーワード: Machado-Joseph病 / RNAi / ポリグルタミン病 / PKR / RNA毒性 / 小脳

研究概要

1)(CAG)79 RNA毒性におけるPKR活性化の関与の検索
培養細胞(HEK293T)において、(CAG)79 RNAの強制発現によるPKRの発現量の変化や活性化をsubcellular fractionationによるウエスタンブロットによって検討した結果、核分画においてQ79や(CAG)79 RNAの強制発現によりPKRの発現量が増加している一方、Q22や(CAA)79 RNAでは変化なかった。
2)培養細胞(HEK293T)において、Dominant negative PKR発現プラスミドの共発現や、PKRに対するsiRNAの導入によってQ22や(CAG)79 RNAの発現によるLDH、トリパンブルー法による検討で細胞死が軽減した。これは(CAG)79 RNA毒性がPKRの活性化を介することを示すものである。
3)ポリグルタミン病におけるPKR活性化のin vivo組織学的検索
Machado-Joseph病のモデルマウスである79個のpolyglutamineの発現したQ79のトランスジェニックマウスの3週齢、6週齢、10週齢の小脳を免疫組織学的に検索した結果、活性化PKR抗体にプルキンエ細胞の核が反応することが示された。さらに、Machado-Joseph病の患者脳3例においても同様に小脳プルキンエ細胞においてPKRが活性化されていることが免疫組織学的に示された。

研究成果

• [雑誌論文] Transgenic siRNA halted amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model. (2005)
  • 著者名/発表者名: Saito Y, Yokota T, Mitani T, Anzai M, Miyagisni M, Taira K, Mizusawa H
  • 雑誌名: J Biol Chem 280 ページ: 42826-42830
• [雑誌論文] Escape from the interferon response associated with RNA interference using vectors that encode long modified hairpin-RNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Akashi H, Miyagishi M.Yokota T, Watanabe T, Hino T, Nishina K, Kohara M, Taira K
  • 雑誌名: Molecular Bio Systems 1 ページ: 382-390
• [雑誌論文] Selective gene silencing of rat ATP-binding cassette G2 transporter in an in vitro blood-brain barrier model by short interfering RNA. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hori S, Ohtsuki S, Ichinowatari M, Yokota T, Ohtsuki M, Terasaki T
  • 雑誌名: J Neurochem 93 ページ: 63-71
• [雑誌論文] New RNAi strategy for selective suppression of mutant allele in polyglutamine disease. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kubodera T, Yokota T, Ishikawa K, Mizusawa H
  • 雑誌名: Oligonucleotides 15 ページ: 298-302
• [雑誌論文] RNA interference as a tool for producing knockdown mice. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mitani T, Yokota T
  • 雑誌名: J Mamm Ova Res 22 ページ: 139-151
• [雑誌論文] RNAiの神経疾患への応用 (2005)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 雑誌名: 脳神経外科速報 15(8) ページ: 765-770
• [雑誌論文] RNAiによるウイルス複製抑制 (2005)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 雑誌名: ウイルス 55(1) ページ: 1-8
• [雑誌論文] RNA干渉による神経変性疾患の遺伝子治療の現状 (2005)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 雑誌名: Curr Insight Neurol Sci 13(3) ページ: 177-179
• [雑誌論文] RNAiの神経変性疾患治療への応用 (2005)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 雑誌名: 細胞工学 24 ページ: 378-382
• [図書] In Non-viral Gene Therapy (2005)
  • 著者名/発表者名: Yokota T
  • 総ページ数: 12
  • 出版者: Springer
• [図書] RNA工学の最前線 (2005)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 総ページ数: 11
  • 出版者: シーエムシー出版