RNAとRNA結合型コアクチベーターの相互作用-転写と選択的スプライシングの接点

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17659281
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 鯉淵 典之 群馬大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80234681)
• 研究分担者: 岩崎 俊晴 群馬大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (80375576)
• キーワード: RNA / 転写因子 / 選択的スプライシング / コアクチベーター / RNA結合蛋白 / CoAA / CoAM

研究概要

近年、ヒトの遺伝子のセットは2〜3万で規定されていることが分かり、一つの遺伝子が数種の機能の異なる蛋白を規定(選択的スプライシング)したり、一つの蛋白が数種の機能を受け持つ(多機能蛋白)ことにより、少ない遺伝子のセットで効率よくシグナル伝達を行っていることが推定されている。我々がクローニングしたcoactivator activator(CoAA)は転写活性化因子として機能するほか、RNA結合ドメインであるRNA recognition motif(RRM)を持ち、プロモーター依存性選択的スプライシング推進因子として機能する。RNAの中には翻訳されて蛋白を産生するRNAの他、RNAのまま機能するsteroid receptor RNA activator(SRA)のようなコアクチベーターが存在する。RRMを持つCoAA及び、そのスプライシング異性体であり、転写抑制因子であるcoactivator modulator(CoAM)の解析を進めることを目的とし、我々は、新たなアッセイ系を樹立した。
1)In vivo免疫沈降蛋白-RNA結合アッセイ
2)磁力ビーズ結合ポリA-RNAを用いた、迅速蛋白-RNA結合アッセイ
3)発光蛋白ルシフェラーゼによるmammalian three-hybrid assay
4)発光RNAによるin vitro蛋白-RNA結合アッセイ
5)in vitro GST蛋白-RNA pull-downアッセイ
以上のアッセイ及び、既存の実験方法から次の新たな知見が得られた。
(1)CoAAはin vivo及び、in vitroにおいて非特異的にRNAと結合する。
(2)In vivo及び、in vitroでCoAAはRNA型コアクチベーターであるSRAと結合するとともに、転写を相乗的に活性化する。
(3)CoAMはCBPにより活性化された転写を基底レベルまで抑制するが、このとき、histone acetyltransferase(HAT)活性も抑制される。
CoAA/CoAMのRRMにRNAが結合することが示された。今後エピジェネティック解析を加えさらに解析を進めるとともにできたら同種の蛋白の解析も行いたい。

研究成果

• [雑誌論文] Low dose hydroxylated PCB induces c-Jun expression in PC12 cells. (2006)
  • 著者名/発表者名: Shimokawa N, Miyazaki W, Iwasaki T, Koibuchi N
  • 雑誌名: Neurotoxicology 27 ページ: 176-183
• [雑誌論文] The Interaction of TR{beta}1-N Terminus with Steroid Receptor Coactivator-1 (SRC-1) Serves a Full Transcriptional Activation Function of SRC-1. (2005)
  • 著者名/発表者名: Iwasaki T, Takeshita A, Miyazaki W, Chin WW, Koibuchi N
  • 雑誌名: Endocrinology 147 ページ: 1452-1457
• [雑誌論文] Synovial sarcoma translocation (SYT) encodes a nuclear receptor coactivator (2005)
  • 著者名/発表者名: Iwasaki T, Koibuchi N, Chin WW.
  • 雑誌名: Endocrinology 146 ページ: 3892-3899
• [雑誌論文] Postnatal changes of steroid receptor coactivator-1 immunoreactivity in rat cerebellar cortex. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yousei B, Jingu H, Ohta M, Umezu M, Koibuchi N.
  • 雑誌名: Thyroid 15 ページ: 314-319
• [雑誌論文] Polychlorinated biphenyl(PCB) alters acid-sensitivity of cultured neurons derived from the medulla oblongata. (2005)
  • 著者名/発表者名: Okada J, Shimokawa N, Koibuchi N.
  • 雑誌名: Int J Biochem Cell Biol 37 ページ: 1368-1374
• [雑誌論文] Retinoid-related receptor(ROR)α mRNA expression is altered in the brain of male mice lacking all ligand-binding thyroid hormone receptor (TR) isoforms. (2005)
  • 著者名/発表者名: Vasudevan N, Kia HK, Hadjimarkou M, Koibuchi N, Chin WW, Forrest D, Vennstrom B, Pfaff DW
  • 雑誌名: Endorine 26 ページ: 25-32
• [雑誌論文] Monitoring synaptogenesis in the developing mouse cerebellum with an original oligonucleotide microarray. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Kondoh Y, Tashiro H, Koibuchi N, Kuroda Y, Tashiro T.
  • 雑誌名: J Neurosci Res 80 ページ: 777-788
• [雑誌論文] Extracelluar acidification enhances DNA binding activity of MafG-FosB heterodimer. (2005)
  • 著者名/発表者名: Shimokawa N, Kumaki I, Qiu C-H, Ohmiya Y, Takayama K, Koibuchi N.
  • 雑誌名: J Cell Physiol 205 ページ: 77-85
• [雑誌論文] Functional characterization of JMJD2A, a histone deacetlyase- and retinoblastoma-binding protein. (2005)
  • 著者名/発表者名: Grey SG, Iglesias AH, Lizcano F, Villanueva R, Camelo S, Jingu H, Teh BT, Koibuchi N, Chin WW, Kokkotou E, Dangond F.
  • 雑誌名: J Biol Chem 280 ページ: 28507-28518
• [雑誌論文] Differential expression of p160 steroid receptor coactivators in the rat testis and epididymis. (2005)
  • 著者名/発表者名: Igarashi-Migitaka J, Takeshita A, Koibuchi N, Yamada S, Ohtani-Kaneko R. Hirata K.
  • 雑誌名: Eur J Endocrinol 153 ページ: 595-604
• [雑誌論文] Neuronal expression of nuclear transcription factor MafG in the rat medulla oblongata after baroreceptor stimulation. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kumaki I, Yang D, Koibuchi N, Takayama K.
  • 雑誌名: Life Sci 78 ページ: 1760-1766
• [雑誌論文] The adrenal gland is a source of stress-induced circulating IL-18. (2005)
  • 著者名/発表者名: Sugama S, Wang N, Ohata H, Shimokawa N, Koibuchi N, Hashimoto M. Conti B.
  • 雑誌名: J Neuroimmunol. 172 ページ: 59-65
• [雑誌論文] 甲状腺ホルモンの中枢作用に及ぼす内分泌かく乱物質の影響 (2005)
  • 著者名/発表者名: 鯉淵典之, 岩崎俊晴, 宮崎航, 岡田淳一, 下川哲昭, 竹下彰, 黒田洋一郎
  • 雑誌名: ホルモンと臨床 53 ページ: 75-80
• [雑誌論文] 臨床分子内分泌学3 -甲状腺・副甲状腺・骨内分泌代謝系- I.甲状腺ホルモン 薬理作用と生理差量 脳の発達と機能維持に対する作用 (2005)
  • 著者名/発表者名: 鯉淵典之
  • 雑誌名: 日本臨床(増刊10) 63 ページ: 78-83
• [雑誌論文] 小脳の疾患と治療 甲状腺ホルモンと小脳障害 (2005)
  • 著者名/発表者名: 鯉淵典之
  • 雑誌名: Clinical Neurosecience 23 ページ: 1419-1421
• [図書] シュプリンガー・フェアラーク東京 (2005)
  • 著者名/発表者名: 鯉淵典之
  • 総ページ数: 105-115
  • 出版者: 甲状腺の発達と脳機能-内分泌撹乱の蓋然性- In:生体統御システムと内分泌撹乱(井口, 井上編)
• [産業財産権] タンパク質-標的物質の結合研究津方法 (2006)
  • 発明者名: 岩崎 俊晴, 鯉淵 典之
  • 権利者名: 国立大学法人群馬大学
  • 産業財産権番号: 日本特許 特願2006-64876
  • 出願年月日: 2006-03-09