| 研究概要 |
成熟Sprague-Dawley系ラット(雄性)に、交感神経β-受容体作動薬のイソプロテレノール(IPR)の連続投与では、動物の死亡率が高いため、唐辛子の辛味成分であるカプサイシン含有食餌(0.1%)の長期摂取(1週間以上)によって、システィンプロテアーゼ阻害タンパク質であるシスタチンSを誘導した。1日間絶食後、ペントバルビタールで麻酔下に顎下腺唾液を採取した。エチレンジアミン四酢酸で処理した後、凍結乾燥した。20mMリン酸緩衝液に平衡化したSephadex G-75を充填したカラムに、同じ緩衝液に溶解した唾液検体を添加し、ゲルクロマトグラフィーを行った。唾液検体は3つのピークに分画される〔G-1(分配係数(Kav);0-0.4)、G-II(Kav;0.4-0.7)およびG-III(Kav;0.7-1.0)〕。各々の画分の収率は、IPR処理と同様な成績であった(G-I:53.5%,G-II:34.0%,G-III:10.5%)。
歯周病の病原細菌であるPorphyromonas gingivalisに対する抗菌活性をディスク法で評価した結果、G-II画分は100μg/ディスクで約15mmの阻止円、そしてG-III画分は100μg/ディスクで約17mmの阻止円が形成された。G-III画分を10mM酢酸アンモニウム溶液に平衡化したSephadex G-25を充填したカラムに添加し、ゲルクロマトグラフィーを行った。280nmの測定波長では2個のピーク(V_oとV_t)のみ検出されたが、ポリペプチド結合特有な吸収波長220nmで測定すると5個のピークとなり、芳香族アミノ酸含量の少ない2画分の存在が明らかとなった。これらの画分の抗菌活性の評価を近日中に行う計画である。活性の認められた画分をC-18の逆相カラムを用いるHPLCによる(0.1%三フッ化酢酸とアセトニトリルの2液の直線濃度勾配溶出)精製とLC-Massによる解析を計画している。
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