メダカにおける性転換変異体の解析による雌化機構

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17770054
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 北野 健 熊本大学, 理学部, 助教授 (40336219)
• キーワード: 性転換 / 性分化 / メダカ

研究概要

メダカは、XY/XX型の性決定機構を持ち、ゲノムシークエンスの完成、多くの近交系統が存在しているなど、変異体解析にも大変優れた実験動物である。申講者は、遺伝的性を外観で識別できる系統にolvas-GFPコンストラクト(生殖細胞をGFP蛍光で可視化できるベクター;基礎生物学研究所田中先生より分譲)を遺伝子導入し、遺伝的性と表現的性を外観で識別できるだけでなく、生殖細胞が体外から可視化できる系統であるolvas-GFPトランスジェニックFLF系統(F2)を作製した。さらに、その系統の中でolvas-GFPコンストラクトの導入により遺伝的雌が雄へと性転換する遺伝子変異系統(性転換変異体)1系統を見出した。本研究では、olvas-GFPコンストラクトが挿入されたゲノム上の位置を調べて原因遺伝子を特定し、その因子の解析を通して雌への性分化機構を解明することを目的に研究を行った。まず、遺伝子変異系統をホモ化するため、ヘテロ型個体同士を交配してホモ型個体を選別した結果、ホモ型雌10個体中に3個体が雄へと性転換していることが分かった。次に、ホモ型雌個体(XX)とホモ型性転換雄個体(XX)を交配し、作出された仔魚の性分化時期における生殖細胞数をカウントした。その結果、15個体中に6個体の生殖細胞数が有意に少なく、雄へと性転換している可能性が示唆された。今後は、ホモ型個体のゲノムDNAをテンプレートに用い、olvas-GFP塩基配列の一部をプライマーとしてゲノムウオーキングPCRを行い、原因遺伝子の単離及び解析を行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Organochlorine contaminants in human adipose tissues from China : mass balance approach for estimating historical exposure to DDTs by Chinese. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakata, H., Nasu, T., Abe, S., Kitano, T., Fan, Q., Li W., Ding, X.
  • 雑誌名: Environmental Science and Technology 39 ページ: 4714-4720
• [雑誌論文] Tamoxifen induces masculinization of genetic females and regulates P450 aromatase and Mullerian inhibiting substance mRNA expression in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus)
  • 著者名/発表者名: Kitano.T., Yoshinaga, N., Shiraishi, E., Koyanagi, T., Abe, S.-I.
  • 雑誌名: Molecular Reproduction and Development (In press)
• [雑誌論文] Assessment of estrogenic chemicals using an estrogen receptor α (ERα)- and ERβ-mediated reporter gene assay in fish
  • 著者名/発表者名: Kitano.T., Koyanagi, T., Adachi, R., Sakimura, N., Takamune, K., Abe, S.-I.
  • 雑誌名: Marine Biology (In press)
• [雑誌論文] ヒラメにおける生殖腺の性分化機構
  • 著者名/発表者名: 北野 健
  • 雑誌名: 水産総合研究センター研究報告 (In press)