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本研究課題の目的は、我々が同定したp27^<Kip1>の新規ユビキチンリガーゼKNAFIのp27^<Kip1>の細胞内発現量調節、細胞周期進行、及び細胞癌化との関連を明らかにすることである。昨年度までの研究では、KNAFIがp27^<Kip1>のユビキチン化を触媒する活性をもつ事、KNAFIはp27^<Kip1>の安定性を負に制御している事等を明らかにした。本年度は以下に記す研究成果を得た。
1.KNAFlによる細胞周期制御機構の解析
(1)KNAFlは細胞周期のGl後期からS期にかけて蛋白質レベルで発現が上昇する事が明らかとなった。このKNAF1の誘導に同期してp27^<Kip1>蛋白質が減少する事も確認できた。また、KNAF1をノックダウンするとGl/S移行期におけるp27^<Kip1>蛋白質の分解が損なわれる事を示した。
(2)KNAFIをノックダウンした細胞の細胞周期の進行はGl期で停止し、S期開始が損なわれる事が明らかとなった。
2.細胞癌化とKNAF1発現の関係の検証
臨床ヒト大腸癌におけるKNAF1の発現をリアルタイムRT-PCRにて検証したところ、腫瘍部分では正常部に比べてKNAFIの発現が亢進している事が判明した。
以上より、G1後期に発現が誘導されるKNAF1はG1/S移行期にp27^<Kip1>のユビキチン化依存的分解を導くことにより細胞周期のGl-S期進行を制御している事、また臨床癌検体では正常部に比べてKNAFIの発現が上昇している事が明らかとなった。
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